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中药钩藤（Uncariae Ramulus Cum Uncis）为茜草科(Rubiaceae)植物钩藤Uncaria rhynchophylla(Miq.) Miq.ex Havil.、大叶钩藤Uncaria macrophyllaWall.、毛钩藤Uncaria hirsute Havil.、华钩藤Uncaria sinensis(Oliv.) Havil.和无柄果钩藤Uncaria sessilifructus Roxb.的干燥带钩茎枝，收载于2010版《中国药典》一部。钩藤作为息风止痉的常用药，其主要活性成分是生物碱及三萜酸。目前，钩藤的物质基础研究比较薄弱，同属替代品种多，不同来源的钩藤之间的化学成分差异不明确，这些都是对钩藤进行质量控制、保证临床用药安全亟待解决的问题。本文以钩藤（U.rhynchophylla）为研究对象，利用多种色谱分离手段和液质联用(LC-MS)分析开展钩藤的物质基础研究，并利用高通量、高分辨率的超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC/LTQ-Orbitrap)分析平台，初步比较了四种不同基源（钩藤、毛钩藤、无柄果钩藤、大叶钩藤）钩藤的化学成分差异。 本课题首先利用植化分离手段对钩藤进行系统的化学成分研究。综合采用液-液萃取和多种色谱分离技术对钩藤的乙酸乙酯部位进行分离，共得到26个化合物，利用多种光谱技术（UV，IR，1D和2D NMR）和高分辨质谱(HR-MS)进行结构鉴定。这些化合物包括15个生物碱和11个三萜酸。其中2个新的生物碱化合物，分别鉴定为16，17-dihydro-O-demethylhirsuteine和16，17-dihydro-O-demethylhirsutine;5个新的三萜酸化合物，分别鉴定为3β，6β，19α-trihydoxy-24-oxo-olean-12-en-28-oic acid(uncarinic acid F)，3β，6β，19α-trihydoxy-23-oxo-olean-12-en-28-oic acid(uncarinic acid G)，3β，6β，19α-trihydoxy-24-oxo-urs-12-en-28-oic acid(uncarinic acid H)，3β，6β，19α-trihydoxy-urs-12,20(30)-dien-28-oic acid(uncarinic acid I)，3β，6β，19α-trihydoxy-23-methoxycarbonyl-olean-12-en-28-oic acid(uncarinic acid J)。对11个三萜酸进行了RAW264.7细胞中LPS-介导的抗NO产生的活性评价，结果表明3个三萜酸化合物具有一定的抑制NO产生的活性(uncarinic acid I，3β-hydroxy-27-(E)-coumaroyl-urs-12-en-28-oic aicd和3β-hydroxy-27-(E)-coumaroyl-oleanen-12-en-28-oic aicd的IC50值分别为1.48μM，7.04μM和1.89μM）。 本课题建立了基于UHPLC/LTQ-Orbitrap平台的定性分析方法，系统地研究钩藤（U.rhynchophylla）中生物碱和三萜酸化合物的多级质谱裂解行为，尽可能多地鉴定四种正品来源钩藤的化学成分并比较它们之间的差异。对15个生物碱和13个三萜酸化合物（其中2个为购买）的电喷雾-多级质谱(ESI-MSn)裂解行为进行对比研究，首次发现了可用于不同骨架区分的特征裂解途径和诊断离子。对于钩藤中的生物碱（正离子模式）:1）C-环发生断裂得到二级产物离子m/z160.08和m/z144.08，为四环单萜氧化吲哚类和四环单萜吲哚类生物碱的特征离子，可用于A-环无含氧取时两种骨架生物碱的区分;2）四环单萜吲哚类生物碱C-环不同位置发生断裂，产生质荷比相差12Da的伴随离子对，可用于鉴定四环单萜吲哚类生物碱;3）四环单萜吲哚类生物碱N-氧化物可以发生中性丢失H2O（-18Da）和自由基丢失·OH（-17Da），能够产生吲哚环母核部分的特征产物离子m/z184.10。对于钩藤中的三萜酸（负离子模式），19-OH取代的齐墩果烷型和乌苏烷型三萜酸，在二级谱图上分别容易脱去CH2O3(62Da)和H2O(18Da)，这种特征的中性丢失可用于区分19-OH取代的齐墩果烷型骨架和乌苏烷型骨架。利用对照品比对、特征裂解行为分析、高分辨ESI-MSn（n=1-4）分析及文献检索，对钩藤、大叶钩藤、毛钩藤和无柄果钩藤进行了较全面的定性分析，最终鉴定或初步推导了123个化合物，包括生物碱类75个，三萜酸48个。 本课题初步比较了四种正品来源钩藤化学成分的差异。四种正品来源钩藤中含有的生物碱类型差别明显，但有所交叉:1）除了四环单萜氧化吲哚类生物碱，钩藤中相对含量丰富的生物碱类型为四环单萜吲哚类生物碱，而毛钩藤、无柄果钩藤、大叶钩藤中主要含有五环单萜氧化吲哚生物碱;2）它们中均含有的是四环单萜氧化吲哚类生物碱——钩藤碱(rhynchophylline)、异钩藤碱(isorhynchophylline)和柯诺辛因碱（corynoxeine）。其中，异钩藤碱在无柄果钩藤中相对含量最高，在毛钩藤中含量最低;钩藤碱在大叶钩藤中相对含量最高;柯诺辛因碱在钩藤和大叶钩藤中相对含量较高，在毛钩藤和无柄果钩藤中含量相对较低。四种正品来源钩藤中均含有乌苏烷型和齐墩果烷型三萜酸类成分，差别不大。 通过本研究，四种正品来源的钩藤的化学成分得到较明确阐释，初步发现了可用于不同钩藤品种鉴定的差异成分。这为更加科学、合理地利用钩藤，保障钩藤的临床疗效，制订钩藤的的质量标准、以及对钩藤进行二次开发提供重要的依据。