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RiccardinD-26是riccardinD的胺甲基化衍生物。RiccardinD是从苔藓植物Dumortierahirsuta分离得到的大环双联苄化合物，研究证明riccardinD能在体外、体内抑制多种肿瘤细胞增殖并诱导凋亡，riccardinD能显著降低APCmin+基因小鼠小肠息肉、腺瘤的数量，提示riccardinD在化学预防方面的作用。但riccardinD的水溶性小、生物利用度差，限制了其进一步应用。为改善其水溶性、增强其生物学效应，我们在riccardinD结构的基础合成了一系列胺甲基化、卤化衍生物，并从中筛选得到riccardinD-26。
在肝癌细胞中，以MTT法和克隆形成法证明riccardinD-26对多种肝癌细胞有明显抑制作用，p53野生型肝癌细胞对riccardinD-26的敏感性高于p53蛋白降低型肝癌细胞，riccardinD-26对人正常肝细胞抑制作用较肿瘤细胞弱。在裸鼠荷瘤模型中，riccardinD-26显著抑制SMMC-7721的生长，且未观察到明显毒性反应。细胞周期分析显示riccardinD-26能将SMMC-7721细胞阻滞在G1期。采用Hoechst33258染色、流式细胞术及westernblotting证明riccardinD-26可诱导细胞凋亡，表现为细胞核浓缩、边缘化，Annexin+/PI+，caspase-9/3及PARP切割带表达量上调。JC-1染色和线粒体/胞浆检测cytochromec显示线粒体膜电势下降，cytochromec释放，Bax/Bcl-2比例上升，提示线粒体介导的凋亡通路被激活。RT-PCR显示riccardinD-26诱导p53及其下游基因Bax、p21Waf1/Cip1转录激活;Westernblotting结果显示riccardinD-26可诱导p53、Bax转位到线粒体;免疫荧光染色显示p53入核抑制剂PFT-α能抑制riccardinD-26引起的p53在核内积累;流式细胞术结果显示p53线粒体转位抑制剂PFT-μ能减轻riccardinD-26引起的线粒体膜电势降低。这些结果表明riccardinD-26通过p53介导的转录依赖性和转录非依赖性途径诱导细胞凋亡。
在多药耐药细胞KB/VCR及其亲本细胞KB中，以MTT法和克隆形成法证明riccardinD-26能在体外显著抑制两种细胞的增殖，对KB/VCR和KB的抑制作用无明显差异。在裸鼠荷瘤模型中，riccardinD-26可显著抑制KB/VCR和KB移植瘤组织的生长，riccardinD-26对KB/VCR瘤组织的生长抑制率比长春新碱更高，且毒性更低。以DAPI染色，AnnexinV/PI双染和westernblotting方法证明riccardinD-26可以引起KB/VCR和KB细胞凋亡。应用TUNEL和westernblottin证明riccardinD-26可引起肿瘤组织的细胞凋亡。JC-1染色和线粒体/胞浆检测cytochromec显示线粒体膜电势下降，cytochromec从线粒体释放进入胞浆，Bax/Bcl-2比例上升，提示线粒介导的凋亡通路的参与。采用westernblotting方法进一步分析显示riccardinD-26以剂量依赖性的方式抑制细胞存活信号ERK、Akt的磷酸化，同时提高凋亡信号p38的磷酸化水平，对JNK的磷酸化水平影响则不明显。上述结果表明riccardinD-26可能通过影响细胞存活通路ERK、Akt和凋亡通路p38来诱导耐药细胞KB/VCR的凋亡，从而发挥抗多药耐药的作用。
综上所述，riccardinD-26是一个抗肿瘤活性好，毒性低的新型化合物，其机制是激活线粒体介导的凋亡途径诱导细胞凋亡。在肝癌细胞中，riccardinD-26激活p53介导的转录依赖性和转录非依赖性途径;riccardinD-26还具有抗多药耐药的作用，其机制可能与抑制存活通路和激活凋亡通路有关。