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目的:已有的研究表明蚊虫唾液组分并非无害的液体,而是具潜在药理活性的液体,对脊椎动物宿主具有抗凝血、抗炎和调节宿主免疫功能的作用,在促进蚊虫吸血与传病上具有重要意义。本研究旨在通过构建白纹伊蚊雌蚊糖水组(SF)与吸血组(BF)唾液腺2D图谱,比较白纹伊蚊雌蚊吸血前后唾液腺蛋白表达差异,筛选与白纹伊蚊雌蚊吸血、传病相关的靶标蛋白,为后续蛋白功能研究奠定基础。 方法:分别采用Pierce蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE电泳分析白纹伊蚊雌蚊各日龄(羽化后0日、3日、5日、7日、10日龄)及饱血蚊唾液腺蛋白质含量和蛋白谱;采用双向电泳技术构建糖水组和饱血组蚊虫唾液腺差异蛋白图谱,并采用MALDI-TOF/TOF质谱分析技术对差异表达蛋白进行质谱分析。 结果:1.各日龄蚊虫单对唾液腺蛋白质量分别约为:0日龄0.677±0.30μg/对唾液腺,3日龄1.454±0.46μg/对唾液腺,饱血组0.945±0.46μg/对唾液腺,5日龄1.95±0.38μg/对唾液腺,7日龄1.733±0.46μg/对唾液腺,10龄1.205±0.43μg/对唾液腺。 2. SDS-PAGE检测到各日龄唾液腺总蛋白有12条主带,吸血前后蛋白条带并没有明显的变化,只表现条带亮度上的差异。 3.成功构建 SF组和BF组唾液腺2D图谱,利用 ImageMaster2D Platinum6.0软件分析得到SF组547个蛋白,BF组517个蛋白。其中有26个蛋白表达差异大于2.0,4个蛋白在吸血组中表达上调,22个蛋白表达下调。质谱分析只检测出23个蛋白(有5个蛋白系同一蛋白)。其中8个蛋白属于看家蛋白,11个属于分泌型蛋白。在11个分泌型蛋白中,2个上调的蛋白系腺苷脱氨酶(ADA)和三磷酸腺苷酶(apyrase);9个下调的蛋白(6个有功能线索,3个没有功能线索)。 结论:成功构建SF组和BF组唾液腺2D图谱;质谱鉴定出吸血诱导的功能蛋白有11个。