人组蛋白乙酰转移酶Elp3多克隆抗体的制备及其应用

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Elp3是Elongator复合物中的一个重要的活性亚基,具有组蛋白乙酰转移酶的催化活性。通过乙酰化特异染色质区组蛋白尾部的赖氨酸残基,Elp3参与特异染色质区结构的改变,为染色质结构调控蛋白提供识别信号,在转录延伸中发挥重要的作用。 为了研究人Elp3蛋白的功能,我们用PCR的方法,以HeLa细胞系基因组DNA为模板,扩增出人Elp3基因编码区的一部分,将其插入原核表达载体pGEX-5X-1中构建Elp3的原核表达质粒;转化大肠杆菌BL21并用IPTG诱导后使Elp3得到高表达。通过Ni<2+>-NTA亲合层析纯化,将得到的Elp3蛋白抗原用于免疫家兔。经过10周免疫后取免疫家兔的血清,经纯化后得到抗Elp3抗体。我们用ELISA的方法测定了得到的多克隆抗体的效价,并用Westem blot的方法证实了Elp3抗原和抗体的有效结合。在ELISA方法检测Elp3反义寡核苷酸对细胞内源Elp3蛋白水平的实验中,我们利用制备的多克隆抗体对细胞内的Elp3蛋白进行杂交,证实Elp3反义寡核苷酸能剂量依赖的降低内源Elp3蛋白的水平,说明我们制备的多克隆抗体是有效的。 我们的实验为在人的细胞系中研究的Elp3功能提供了重要的实验手段,有助于我们对其在真核基因表达调控中的作用有新的认识。
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