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药物代谢主要在肝脏，依赖于肝微粒体中的多种酶系，最重要的是细胞色素P450混合功能氧化酶。CYP450的基因多态性是造成药物不良反应的主要原因。孙忠实教授报道药物不良反应造成的死亡率日益升高。在过去的几十年里，药物研发中对化合物代谢性质的筛选放在临床前研究的动物实验研究阶段。这种药物研发模式存在着很大的缺陷，不同的种属动物与人之间存在着很大的差异，尤其是在代谢方面，参与化合物代谢的酶种类、酶的贡献程度、反应类型以及代谢产物等均可能不相同，把动物实验结果外推到人体误差高且准确性低，同时，通量低、价格成本高。随着分子生物学、基因组学、蛋白质组学、生物信息学的发展，使药物研发的上游基础技术有了极大的突破。采用人源组织或人源酶的体外实验，花费少、周期短、能提供大量的信息，最重要的是还能去除种属差异的影响。本文将CYP450酶建立起体外筛选体系，进行体外代谢数据和性质到体内代谢数据和性质的预测，具有了高通量、高效率、高准确性的特点。具体方法是以市售CYP2D6 WT的cDNA作为模板，经PCR扩增后，构建pYES2／CT-WT重组质粒；然后利用PCR定点突变的方法分别引入8个单点突变位点；测序确定序列完全正确后，将质粒以电穿孔法转化至整合了POR基因的酿酒酵母菌株BJ5628，半乳糖诱导表达CYP2D6蛋白，经裂解、差速离心提取CYP2D6微粒体后，连续光谱荧光仪上用CYP2D6的特异底物AMMC测定酶的活性，得到酶动力学参数Km、Vman，并用非线性回归做图；然后选用12种临床常用药做药物抑制实验，测定IC50。结果显示全序列测序证明正确获得了8株单点突变的DNA(R28C，P34S，L91M，R173C，R201H，H324P，E410K，R440H)，Western-blotting用针对重组酶C端的V5免疫标记的特异抗体证明了CYP2D6蛋白的表达成功。荧光检测法的活性检测结果表明不同的SNP的活性不同，其Km，Vmax，及Vmax／Km的值均有差异。其中H324P，R440H完全没有活性；P34S的活性显著降低。药物抑制实验结果表明有些药物依赖基因的多态性，有些对酶完全没有抑制作用；并且奎尼丁(Quinidine)对酶的抑制作用最强，是CYP2D6的特异性抑制剂。结果证明了CYP2D6在酿酒酵母细胞中表达量较高，且不同位点的单核苷酸突变决定了蛋白活性的不同，体外的荧光活性检测法可以间接表征酶在体内的活性，药物抑制实验能够阐明某些药物代谢个体差异的原因。