重组人凋亡素2配体的结晶研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yoyomai19781022
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凋亡素2配体(Apo2L),即肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体,肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员之一,是一种具有良好应用前景的抗肿瘤蛋白。本论文将结晶技术应用到凋亡素2配体蛋白的分离纯化过程中,对其结晶过程进行研究并得到结果如下: (1)以纯度95%以上的Apo2L蛋白溶液为研究对象,对Apo2L蛋白结晶条件进行了优化,实验确定结晶母液蛋白浓度4mg/ml、pH 7.0、100 mM NaCl为最佳的结晶体系。 (2)将结晶技术运用到含有较多杂蛋白的粗蛋白溶液中来分离提纯Apo2L蛋白。结果表明:只要起始结晶母液中Apo2L蛋白的纯度达到35%,就可以通过添加2%的PEG4000来使Apo2L蛋白结晶,Apo2L晶体蛋白的纯度为96.9%,实际结晶率可以达到77.2%,比柱层析方法中的目标蛋白回收率提高了24%。 (3)晶体状态下的Apo2L蛋白远远要比溶液状态时更稳定,放置5个月后,晶体状态的Apo2L蛋白存留活性为起始活性的80%,而溶液状态的Apo2L蛋白活性却全部丧失。 综合考察目标蛋白回收率、稳定性以及生产成本可确定在小规模实验范围内用结晶技术代替柱层析方法来分离纯化Ap0o2L蛋白有着更大的优越性。
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