论文部分内容阅读
食管鳞癌是人类最常见的十大恶性肿瘤之一，全世界每年新发病例约40万。我国是食管鳞癌高发区，每年新发病例一半在中国。1982年Syrjianen首先通过对60例食管鳞癌进行组织形态学观察发现，约40％具有HPV感染的特征性改变，从而预测HPV可能是食管癌的致病因素。本实验室有多年的研究HPV与食管癌关系的基础，前期研究发现：(1)食管癌分子流行病学调查研究南方部分区域(汕头、揭阳)食管癌组织中50.80％带有HPV不同亚型的病毒DNA，其中16，18型可达60％左右。80％的癌细胞有HPV DNA整合入细胞DNA，这是病毒致癌的重要因素：(2)HPV18E6E7能诱发人胎食管正常上皮细胞永生化和癌变(3)在HPV诱发食管正常上皮细胞永生化前期加入化学致癌物，促癌物、放射等均可促进诱导细胞永生化和恶性变。这直接证明食管癌的发生可能是多因素协同作用诱发的癌变。 这些初步研究结果进一步揭示：HPV感染可能是中国人食管癌发生的重要致病危险因素。但是，多数研究者认为食管癌高发区HPV感染明显高于食管癌低发区。农村经济条件差的居民HPV感染较高。必须指出的是，世界各地食管癌组织和癌前病变组织中HPV检出率结果并不一致，研究结果难以得出科学结论，主要原因可能是①样本量小；②病人来源分散；③HPV检测方法不统一；④单一因素分析多，很少分析环境交互作用。 本论文设计的是以中国多个的地方人群食管癌组织为样本分析其HPV阳性率，型别分布，进一步阐明HPV与食管癌发生的关系；检测淮河流域食管癌HPV存在情况，分析当地食管癌高发病因；建立多个新的食管癌细胞株结合已有细胞株，分析其HPV存在的状态，分析HPV在癌变过程中所起的作用；对近三十年的资料进行收集并做了统计分析，探讨整体研究背景及结果；对常见有HPV存在的宫颈及食管癌细胞株进行整合位点检测，分析HPV整合位点对HPV致癌性的影响；研究HPV诱导食管癌过程中病人血清学检测结果，尝试建立血清学诊断平台，探讨相关抗体作为早期诊断的可行性。最终分析HPV在食管癌发生中起的作用。 本文通过对近三十年的世界上消化道肿瘤与HPV关系的分散的研究数据进行统计分析发现，OR>1，说明HPV是上消化道肿瘤包括食管癌发生的危险因素。 食管癌高发区安阳的食管鳞癌标本检测结果显示，新鲜鳞癌标本HPV L1阳性率82.6％，其中HPV16型与HPV18感染率均为34.8％。HPV16和HPVl8共感染的标本是3例，占总标本数的13％。石蜡标本HPVL1检测阳性率为78.2％，标本的HPV16型与HPV18型感染率分别为30.4％和17.4％，HPV16与HPV18共感染的标本占17.4％。由检测结果可见，食管癌标本HPV感染率较高，其中HPV16型与HPV18型感染占主要型别，还有51型等其他稀有型别，以高危型别为主。同时对磁县、林州、洛阳等地的检测HPV阳性率也较高，同时发现其型别分布与已经报道的宫颈癌不同，HPV18型占的比例比宫颈癌中要高。 从收集的淮河流域66份食管癌的DNA检测结果发现，HPV感染率较高，其中主要是HPV16，18两种高危型感染。而活检食管癌标本又比手术大标本的感染率高，分别达到76.5％，55.9％，此结果提示HPV感染是食管癌高发区人群患食管癌的重要危险因素之一。同国内食管癌高发区的检测结果比较发现与四川盐亭、广东潮汕地区的检测结果接近。对标本感染型别详细分型发现存在小量食管癌标本感染HPV45，52，33，53，58，51等高危型别。分析可能是当地食管癌高发的病因之一。 从食管癌高发区的三位食管癌患者身上取的新鲜标本癌组织，用原代培养的方法培养出了三株食管鳞癌细胞株，命名CEC1，CEC2，CEC3。通过对收集及新建的的食管癌及宫颈癌细胞株进行检测发现，有多个食管癌细胞株有HPV存在，且可以检测到HPV癌蛋白。高比例的HPV的存在预测可能其可能是食管癌发生的病因。 利用细胞学做媒介，探讨了血清学检测HPV相关抗体的方法，检测发现部分癌症病人血清可以检测到HPV相关抗体的存在，包括IgG和IgA。 细胞株整合位点研究，发现HPV16型在SiHa细胞系中病毒基因转录的位点在13q21-22的位置，与前人研究一致。在HeLa细胞系中，HPV18型选择在8q24的位置表达。CaSki中整合的HPV只在13q21-22的地方表达。而HPV18型食管癌细胞系EC109和EC9796表达位点也是8号染色体。整合位点可能与食管癌的发生有关。 综合实验结果，食管癌发生可能是HPV与其他环境因素协同作用的结果，HPV在癌症发生过程中扮演着重要角色。