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目的：Heymann肾炎是人类特发性膜性肾病（idiopathic membranous nephropathy，IMN）的经典动物肾炎模型，具有人类特发性膜性肾病的临床及病理特点。近些年的研究结果显示 Heymann肾炎发病机制涉及补体活化、氧化反应、细胞因子激活、内质网应激和自噬等个多方面。在Heymann肾炎发病过程中，补体活化后产生膜攻击复合物C5b-9，可诱导生成大量的活性氧。大量动物实验证实，活性氧的堆积可激活Nrf2/HO-1信号通路，发挥抗氧化应激作用，从而阻止脂质过氧化反应的发生。此外，在Heymann肾炎后期，主要的病理改变是IV型胶原、纤维连接蛋白和层粘连蛋白等细胞外基质（extracellular matrix，ECM）成分增多堆积。研究证实转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）可以促进ECM的形成，在肾小球硬化及纤维化机制中占有重要地位。这样，氧化反应与炎症因子协调作用，共同导致了肾脏组织病变。探索新型的治疗方法，阻断或抑制氧化和炎症反应，延缓肾功能损害，一直都是肾脏病领域研究的热点。早些年，国内外学者一直认为氢气属于生理性惰性气体。随着研究的深入，越来越多的证据显示氢气具有选择性抗氧化、抗炎及抗凋亡的作用，但与肾脏病相关的研究报道甚少。 本课题拟通过建立主动型Heymann肾炎（Active Heymann Nephritis，AHN）大鼠模型，应用免疫组织化学染色、实时定量PCR等方法检测肾脏组织中Nrf2、HO-1及TGF-β1、IV型胶原的表达情况。并给予富氢液（15mg/Kg）进行干预，观察AHN大鼠肾脏组织内各指标的表达状况，探讨富氢液对其干预作用及机制，为人类IMN的预防和治疗提供新的思路。 方法：选择SD大鼠（健康清洁级，雄性）36只，体重约200±20g，随机分为正常对照（NC组，n=12）、Heymann肾炎模型组（HN组，n=12）、富氢液干预组（HRS组，n=12）。适应性喂养1周后，给予HN组、HRS组大鼠腹腔注射免疫原2ml/只(含肾皮质0.5g)，制备 Heymann肾炎大鼠模型；NC组大鼠给予腹腔注射佐剂对照2ml/只，作为正常对照；腹腔注射方式均为每两周一次，共6次。自注射免疫原第一次起，HRS组大鼠每日给予（浓度0.8mmol/L）富氢液15ml/kg灌胃，NC组、HN组则每日给予等量的生理盐水灌胃。实验期间，所有大鼠均饲养于温度（20℃-26℃）且湿度（45％-70%）的相对恒定的环境中，自由进食水。于4周末、8周末，将大鼠置于清洁代谢笼内，留取24小时尿并测定24小时尿蛋白定量。大鼠在注射免疫原后4周末，高于正常大鼠24小时尿蛋白定量则为肾炎形成的标志。至第一次注射免疫原后12周末、14周末，每组随机选取6只大鼠，测定24小时尿蛋白定量、血肌酐、血尿素氮。并收集大鼠肾组织标本，制备病理组织切片，以备苏木素-伊红（HE）染色、糖原（PAS）染色及免疫组织化学染色，观察大鼠肾组织病理变化；免疫组织化学及实时定量PCR方法检测Nrf2、HO-1及TGF-β1、IV型胶原的表达情况。实验所得数据用均数±标准差（x±S）表示，应用SPSS20.0统计分析软件对数据进行处理，满足正态性和方差齐性检验的数据采用单因素方差分析，不满足正态性和方差齐性检验的数据资料采用非参数检验分析，P＜0.05有统计学意义。 结果： 1.一般情况 NC组大鼠饮食正常，毛发光亮柔顺，生长发育良好。HN组、HRS组大鼠腹腔注射免疫原后逐渐出现饮食减少，反应迟钝，毛发无光，部分大鼠出现腹水。其中HRS大鼠较HN组大鼠情况稍好。 2.生化指标 2.1 24小时尿蛋白定量 与同期NC组相比，所有时间点中，HN组、HRS组大鼠24小时尿蛋白水平均升高（P＜0.05）。其中，与HN组相比，4周末，HRS组大鼠24小时尿蛋白水平无明显变化（P＞0.05）；8周末、12周末、14周末，HRS组大鼠24小时尿蛋白水平显著下降（P＜0.05）。 2.2 血肌酐、血尿素氮 与同期NC组相比，12周末、14周末，HN组、HRS组大鼠血肌酐、血尿素氮水平升高（P＜0.05）。与HN组相比，12周末，HRS组血肌酐水平未见明显变化（P＞0.05），而血尿素氮水平出现下降（P＜0.05）；14周末，HRS组血肌酐、血尿素氮水平均出现明显下降（P＜0.05）。 3.肾脏组织变化 光镜下显示，NC组大鼠肾组织结构正常，基底膜均匀一致，无增厚，无系膜细胞、系膜基质增多等异常改变。与NC组相比，HN组和HRS大鼠肾小球基底膜呈不同程度增厚,内皮细胞胞质肿胀;肾小管结构紊乱,间质内有局灶性淋巴细胞及浆细胞浸润。且HN组较HRS组肾脏组织病变更加严重，14周末较12周末病理改变更明显。 4.免疫组织化学检测 与同期NC组相比，12周末、14周末时，HRS组、HN组Nrf2、HO-1、TGF-β1、IV型胶原表达均增多（P＜0.05）；与同期HN组相比，HRS组TGF-β1、IV型胶原表达水平下降（P＜0.05），Nrf2、HO-1表达有所增多（P＜0.05）。 5.实时定量PCR检测 与同期NC组相比，12周末、14周末时，HRS组、HN组Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA、TGF-β1 mRNA、IV型胶原mRNA表达均增多（P＜0.05）；与同期HN组相比，HRS组TGF-β1 mRNA、IV型胶原mRNA表达水平不同程度下降（P＜0.05），而Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达有所增多（P＜0.05）。 结论： 1.HN组大鼠肾脏组织中，Nrf2、HO-1抗氧化应激通路蛋白表达增加，且TGF-β1、IV型胶原表达升高，表明有氧化应激与纤维化存在。 2.富氢液可上调Nrf2、HO-1的水平，并减少TGF-β1、IV型胶原的表达，从而减轻肾脏组织氧化应激损伤，延缓肾脏纤维化，具有一定的肾脏保护作用。