【摘 要】
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目的：癫痫是一种以短暂的脑功能失常为特征的慢性脑部疾病，是由于脑内神经元的过度放电所致。癫痫的发病机制目前仍未明确，研究表明，在分子水平，苔藓纤维出芽(Mossy Fiber Sprouti
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目的：癫痫是一种以短暂的脑功能失常为特征的慢性脑部疾病，是由于脑内神经元的过度放电所致。癫痫的发病机制目前仍未明确，研究表明，在分子水平，苔藓纤维出芽(Mossy Fiber Sprouting，MFS)是癫痫发作后一种最常见的病理改变。Semaphorin家族是一类脑信号转导蛋白，MFS的发生发展与Semaphorin家族的表达异常具有一定的相关性。Semaphorins3F（Sema3F）是 Semaphorins家族中的一员，在神经系统表达是最具有特征性，尤其在神经系统的发育过程中。Sema3F在全身各部位均有表达，但Sema3F的受体neuropilin-2仅在海马存在。通过计划对大鼠海马神经元的原代培养，对原代海马神经元给予不同浓度的Sema3F干预，观察在不同作用时间，不同浓度Sema3F干预后，大鼠海马神经元轴突生长锥的变化，了解Sema3F对海马神经元的作用，以及时间及浓度的相关性。为诊断和治疗与Sema3F相关的疾病寻找出理论依据，从而为神经系统疾病，如难治性癫痫，神经损伤再修复等提供发病机制及治疗靶点。 方法：提取出生24小时内新生SD大鼠海马神经元的原代细胞，采用无血清培养技术培养海马神经元，鉴定海马神经元的纯度。分别给予不同浓度的Sema3F干预，使用倒置显微镜，观察不同浓度的Sema3F干预后，在不同时间海马神经元轴突的变化。了解Sema3F的生理学功能。 结果：刚接种时，海马神经元的原代细胞呈圆形，培养30分钟后，观察到细胞开始贴壁，大部分细胞在2小时后均贴壁，从圆形变为椭圆形，后逐渐出现1到2个突起。培养至第2天神经元胞体增大，呈现多种形态，如椭圆形、三角形、多边形等，胞质丰富，突起明显延长，数量增多，形态多样。培养至第3天，神经元胞体进一步增大、变形，突起进一步延伸，相互连接呈像丝带状，多个神经元连接在一起形成神经元网络。后神经元不断分化成熟，培养至11天，神经元开始聚集成团块状神经元网络变稠密，16天后，神经元开始退化，细胞数目逐渐减少。应用神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定培养神经元的纯度大于95％。依据神经元形态变化的规律，在培养3天的新生大鼠海马神经元培养基中加入不同浓度的Sema3F，在不同作用时间观察大鼠海马神经元轴突生长锥的变化，发现 Sema3F可导致大鼠海马神经元轴突生长锥的塌陷，并随着时间及浓度的增加塌陷比例增加，差异具有统计学意义。 结论：提取新生24小时内的SD大鼠海马神经元，采用无血清培养技术联合细胞培养添加剂B27可以成功培养出了高纯度的海马神经元。选择神经元的特异性标志物（特异性烯醇化酶）标志新生大鼠海马神经元，发现无血清培养技术可以培养出的海马神经元纯度可达95%。Sema3F可以快速的使大鼠原代海马神经元的轴突生长锥塌陷；Sema3F对海马神经元轴突生长锥的塌陷作用表现为时间及剂量依赖性。
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