‘月光’等5个枣品种的花药离体培养

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:a715362633
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以‘月光’、‘冬枣’、‘长红枣’、‘苹果枣’、‘金丝小枣’5个枣树优良品种为试验材料,研究了基因型、基本培养基、生长调节剂、碳源、秋水仙素等因素对枣花药培养的影响。首次获得了‘长红枣’和‘苹果枣’的花药再生植株,优化了‘月光’、‘冬枣’及‘金丝小枣’的花药植株再生体系。通过培养经秋水仙素诱导后含有2n配子的‘月光’花药,获得了一株花粉植株(二倍体)。建立了‘月光’花药植株的快繁体系。此外,系统研究了花药再生植株玻璃化恢复技术。主要结果如下:1枣花药愈伤组织诱导基因型、生长调节剂、基本培养基及碳源对枣花药愈伤的诱导有显著影响。20g/L麦芽糖利于枣花药愈伤组织的诱导。适宜诱导枣花药愈伤组织的培养基为MS+1.0mg/L2,4-D+2.0mg/L6-BA+5.5g/L琼脂+20g/L麦芽糖。‘长红枣’出愈率高达100%,‘月光’、经秋水仙素处理后的‘月光’、‘苹果枣’、‘冬枣’出愈率均在80%以上,愈伤组织褐化率均小于22%。适宜‘金丝小枣’诱导花药愈伤的培养基为1/2MS+0.5mg/L NAA+2.0mg/L6-BA+5.5g/L琼脂+20g/L麦芽糖,出愈率达68.2%,褐化率仅为13.0%。施用秋水仙素利于‘月光’诱导花药愈伤,通过对‘月光’及秋水仙素处理后‘月光’2年的重复试验表明,筛选的培养基诱导效果稳定。2枣花药愈伤组织增殖及分化基因型、生长调节剂对枣花药愈伤的增殖及分化有显著影响。适宜诱导枣花药愈伤不定芽分化的培养基为MS+NAA0.3~0.5mg/L+6-BA1.0~1.5mg/L+琼脂5.5g/L+麦芽糖20g/L。在5个品种中,‘月光’出芽率最高(达86.9%),‘金丝小枣’仅为20.4%。愈伤组织的出芽效果与诱导植株数量无显著差异,但褐化率显著影响愈伤组织的出芽率。高浓度细胞分裂素利于愈伤组织的增殖,但加重了植株的玻璃化程度。培养基中添加AgNO3,愈伤出苗数增加,但延长了再生出苗的时间,愈伤出芽率减小,植株矮小,生长缓慢,愈伤组织增殖缓慢,褐化严重。综合考率,不定芽分化培养基中不适宜添加AgNO3。秋水仙素利于花药植株的再生,可以降低愈伤组织褐化率,提高愈伤发芽率。3花药植株玻璃化的恢复0.4mg/L IBA+1.0mg/L6-BA利于玻璃化苗的继代,平均生长量达1.93cm/株。适宜玻璃苗恢复培养基为MS+IBA0.4mg/L+BA1.0mg/L+聚乙烯醇2g/L+琼脂5.5g/L+蔗糖15g/L+麦芽糖7.5g/L,培养基封口材料为封口膜,培养温度为26℃。植株高度在1.5cm以上玻璃化恢复效果好。4花药植株来源鉴定利用SSR分子标记技术,使用7对SSR引物鉴定了125株‘月光’花药植株及210株经秋水仙素处理后的‘月光’花药植株,发现一株的电泳条带出现缺失、位置差异的现象,为花粉植株。利用流式细胞仪检测植株倍性,测得30个株系均为二倍体。此花粉植株(二倍体)是通过培养秋水仙素处理后的‘月光’花药获得的。
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