【摘 要】
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目的探讨PTEN在脓毒症内皮细胞中的表达方法80只健康SD雄性大鼠(250g±±29g),随机分为4组(每组20只),盲肠结扎穿孔三组(25%、50%、75%)和对照组,通过比较盲肠结扎的不同比例
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目的探讨PTEN在脓毒症内皮细胞中的表达方法80只健康SD雄性大鼠(250g±±29g),随机分为4组(每组20只),盲肠结扎穿孔三组(25%、50%、75%)和对照组,通过比较盲肠结扎的不同比例观察脓毒症大鼠的生存率；盲肠结扎50%穿孔组作为脓毒症造模组,在脓毒症造模48小时后取血液和肺组织样本,检测脓毒症大鼠血液中LPS、IL-1β、IL-6以及TNF-α的浓度。用血浆作用于体外培养的脐静脉内皮细胞,并应用免疫组化方法检测PTEN的表达状况；用Westen-blot的方法检测脐静脉内皮细胞中PTEN蛋白的表达,并用RT-PCR的方法检测PTEN的mRNA的水平。结果通过观察我们发现随着盲肠结扎比例的提高,脓毒症大鼠的死亡率也在增加,最后我们采用50%结扎比例的盲肠作为CLP的标准模型。经检测LPS：对照组为0.19±0.1(pg/m1),脓毒症组为3.39±±1.26(pg/m1)；IL-6：对照组为20.35±8.11(pg/m1),脓毒症组为314.81.92±±48.7(pg/m1)；IL-1β：对照组为18.73±4.76(pg/m1),脓毒症组为125.9±17.98(pg/m1)；TNF-α：对照组为12.54±5.76(pg/m1),脓毒症组为105.59±±18.97(pg/m1)。各种指标在脓毒症组均明显上升,与对照组相比较均有显著性差异(p<0.05)。免疫组化检测发现在CLP组脐静脉内皮细胞中PTEN的表达明显增高；Westen-blot的方法检测的HUVEC中PTEN蛋白表达增高；RT-PCR的结果也证实在脓毒症大鼠血液作用后的HUVEC中PTEN的mRNA水平增高。CLP组与对照组相比差异有显著性(P<0.05)结论脓毒症中PTEN基因在HUVEC中表达增高,提示PTEN在脓毒症内皮细胞损伤中发挥了一定的作用。
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