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目的:1.研究LncRNAMALATI在肺缺血再灌注损伤(LIRI)中的作用;2.探讨肺缺血再灌注肺损伤LncRNAMALAT1表达与IL-8高表达的内在关系,为肺移植缺血再灌注损伤提供新的治疗靶点。方法:1.(1)将30只雄性大鼠随机分为三组,每组10只,分别为空白(Blank)组、假手术(Sham)组和肺缺血再灌注(LIRI)组。LIRI组开胸后游离肺门并离断下肺韧带,使用无创血管夹夹闭左肺肺门90min,再灌注180min后对大鼠实施安乐死并收集肺静脉血及左肺组织进行检测;Sham组仅开胸游离肺门并离断下肺韧带,不夹闭肺门,90min后关胸,关胸180min后对大鼠实施安乐死并收集肺静脉血及左肺组织进行检测;Blank组不做任何处理。(2)测定肺静脉氧分压,以验证LIRI大鼠模型构建成功。(3)在光学显微镜下观察肺组织HE染色以评估肺损伤的病理变化。(4)计算肺的湿/干(W/D)重比。(5)通过免疫组化实验(IHC)测定肺组织中巨噬细胞的阳性表达水平。(6)检测肺组织中的细胞凋亡率。(7)通过酶联免疫吸附剂检测(ELISA)方法检测血清中炎症因子的表达水平。(8)应用qRT-PCR检测肺组织MALAT1的表达水平。2.(1)将40只雄性大鼠随机分为四组,每组10只,分别为空白(Blank)组、假手术(Sham)组、阴性对照(sh-NC)组和干扰(sh-MALAT1)组。Blank组及Sham组的构建同前一部分;sh-NC组及sh-MALAT1组在LIRI大鼠模型基础上分别经尾静脉注射哈sh-NC或sh-MALAT1的腺病毒,1周后处死大鼠并收集肺静脉血及左肺组织进行检测。(2)通过qRT-PCR检测MALAT1表达水平,测定肺缺血再灌注后的肺静脉氧分压,验证成功建立sh-MALAT1介导的大鼠模型。(3)光学显微镜下观察肺组织HE染色以评估肺损伤的病理变化。(4)计算肺的W/D重比。(5)通过免疫组化实验(IHC)测定肺组织中巨噬细胞的阳性表达水平。(6)通过ELISA方法检测血清中白细胞介素-8(IL-8)的表达水平。结果1.(1)LIRI组肺静脉氧分压(PO2)明显低于Blank组和Sham组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)HE染色显示,与Blank组和Sham组相比,LIRI组观察到更严重的肺泡出血、水肿和间质炎症。(3)LIRI组巨噬细胞的阳性表达高于Blank和Sham组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)LIRI组的凋亡细胞数量高于Blank和Sham组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(5)与Blank和Sham组相比,LIRI组的湿/干(W/D)比增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。(6)IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4和IL-10在肺缺血再灌注组均升高,所有测试的炎症因子中,IL-8在外周静脉中的表达最高。IL-8在LIRI组的表达明显高于Blank和Sham组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(7)应用qRT-PCR来检测MALAT1的表达,结果显示LIRI组的MALAT1表达显著高于Blank和Sham组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.(1)qRT-PCR结果表明,与sh-NC组相比,sh-MALAT1组的MALAT1显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)肺静脉血气分析显示,sh-MALAT1组肺静脉PO2高于sh-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)HE染色显示sh-MALAT1组与sh-NC组相比,肺损伤显著减少。(4)sh-MALAT1组巨噬细胞的阳性细胞数明显低于sh-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)相对于sh-NC组,sh-MALAT1组的W/D比显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(6)ELISA显示IL-8的表达在sh-MALAT1组明显低于sh-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LIRI引起明显的肺组织损伤,沉默MALAT1可通过降低IL-8的表达水平减轻LIRI大鼠的炎症损伤。