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以YSF5的基因组DNA为模板，PCR扩增得到约0.84 kb的ADH2启动子的上游调控序列(PU-ADH2)。PCR产物纯化后由Xbal和BglII酶切，然后与由Xbal和BglII消化的pLZ-2连接，得到质粒pLZ-A。以YSF5的基因组DNA为模板，PCR扩增得到约1.04 kb的完整的铜螯合蛋白基因CUPI。PCR产物纯化后由BamHI和EcoRI酶切，然后捅入到BamHI和EcoRI消化的YEp352中，得到质粒YEp-CUP。将用BamHI和EcoRI从YFp-S上切下的FLONS和用BamHI和EcoRI从YEp-CUP上切下的CUPI捅入到由BglII线性化的pLZ-A中，得到质粒pIC10。pIC10中，PU-ADH2 FLONS、CUP1和乙酰乳酸合成酶基因ILV2构成重组表达盒I10，其中PU-ADH2作为FLONS的调控元件，CUPI作为转化子的筛选标记，两端的ILV2序列用于同源重组。
将pIC10用BamHI和PstI消化，然后将含有I10的片段纯化后转化工业酵母Saccharomyces cereVlsiae YSF5，I10通过其两端的ILV2的序列整合到YSF5染色体的ILV2基因位点。用含有5.5 mM CuSO4的YEPD平板筛选转化子，然后对转化子进行PCR鉴定。絮凝分析表明转化子的絮凝能力是受体菌的1.5-2.3倍，且由于受到葡萄糖、麦芽糖和蔗糖的抑制，证明属于新絮凝表型。存遗传稳定性实验中，转化子的铜抗性稳定但絮凝水平有所波动。在模拟发酵实验中转化子的双乙酰产量较受体菌有所降低，转化子与受体菌的双乙酰产量的比值在发酵中最低达83％，在发酵结束时是92％。