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[目的]
鼻咽癌为我国华南地区常见的恶性肿瘤之一，因为缺乏对复发及转移的有效控制，近年来在提高患者长期生存率方面遇到了瓶颈。传统的放化疗手段无法完全消除肿瘤，因其仅杀灭了已分化的低致瘤性癌细胞，而残留的真正致瘤的肿瘤干细胞成为复发和转移的根源。从鼻咽癌细胞中分离出肿瘤干细胞，研究其在体内体外的生物学特性，探索鼻咽癌肿瘤干细胞在分化激活的过程中，发生的代谢重编程与上皮-间质转化，为寻找早期诊断方法及特异性的治疗手段提供新的思路。
[方法]
(1)利用克隆形成实验验证细胞的转移生长能力，药物毒性实验验证细胞的多药耐药性，裸鼠移植瘤实验验证细胞的体内致瘤性，q-RT-PCR、WB及免疫组化实验观察细胞在体内体外肿瘤干细胞相关基因的表达情况。
(2)利用台盼蓝染色计数及细胞周期分析观察细胞的增殖情况与细胞周期分布，利用JC-1染色法和ATP定量检测等方法证观察细胞线粒体氧化磷酸化的功能，利用乳酸定量检测与乳酸脱氢酶活性检测等方法观察细胞糖酵解的活性水平，利用体外血管生成实验等方法观察细胞分泌上清诱导血管生成的能力，利用q-RT-PCR、WB及免疫组化实验探索可能的信号通路机制。
(3)利用悬浮培养成球实验观察细胞的干细胞性质，利用Transwell迁移运动实验观察细胞迁移运动能力，利用Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力，利用吉姆萨-瑞氏染色观察细胞形态学的变化，并利用q-RT-PCR和WB实验验证细胞上皮-间质转化的相关基因表达情况。
[结果]
(1)与CNE-2相比，CNE-2S具有更强的克隆形成能力，对多种临床常用抗癌药均具明显的耐药性，及更强的体内致瘤能力，并高表达Oct4、Sox2及Nanog等肿瘤干细胞特征性转录因子。
(2)经血清诱导分化的CNE-2S-I出现了增殖激活的现象，且能在长期的体内培养过程中保持高增殖能力，产生的原因与细胞周期相关蛋白的表达变化有关。
(3)经血清诱导分化的CNE-2S-I出现了代谢重编程，并增强了诱导血管生成能力。代谢重编程表现为线粒体氧化磷酸化功能的降低和糖酵解能力的加强,而血管生成能力增强可能与HIF介导的代谢重编程有关。
(4)经血清诱导分化的CNE-2S-I丧失了肿瘤干细胞的特性但获得了更强的迁移运动和侵袭能力，并伴随着上皮-间质转化的发生。
[结论]
实验表明，本课题组分离得到的CNE-2S亚群细胞具有肿瘤干细胞的特性，可以作为鼻咽癌肿瘤干细胞的模型继续深入研究;代谢重编程与上皮-间质转化在鼻咽癌肿瘤干细胞分化激活的过程起到重要作用，推动肿瘤干细胞在分化过程中获得更高的增殖能力、诱导血管生成的能力及迁移侵袭能力。