H<,2>O<,2>/HCl混合液和热处理改性纯钛表面对成骨细胞的黏附、增殖和分化的影响

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:neu20063043
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用物理化学的方法对钛金属的表面特征改性修饰来提高种植体的骨整合能力是当前口腔种植学的一个研究热点。以往研究表明用H2O2/HCl溶液和400℃加热一小时处理钛金属表面能形成带有大量活跃羟基功能团(—OH)锐钛矿晶型的二氧化钛凝胶层,它能够在模拟体液中诱导羟磷灰石颗粒生成,提示其可能具有一定的生物活性。本研究观察了H2O2/HCl溶液和400℃加热处理后的钛片对成骨细胞的黏附、增殖和分化的影响。本研究首先观察了喷砂和双酸蚀后的粗糙纯钛金属再使用H2O2/HCl溶液和400℃加热处理后钛片(SAHT)表面形态的改变,并与光滑的钛片(PT)、喷砂和双酸蚀后粗糙钛片(SAT)的表面形态做比较。接着在三组钛片的表面接种小鼠的成骨细胞MC3T3-E1,培养1、3和24小时后做肌动蛋白和细胞核的荧光染色,观察细胞骨架和形态的变化,计算细胞形态指数,观察细胞伸展的情况;同时通过四唑盐比色试验(MTT)计算三种表面对细胞在接种培养1、3和24小时黏附数量的差异,因而从细胞接种24小时内细胞的形态和数量方面来说明不同表面的材料对成骨细胞MC3T3-E1黏附的影响。细胞的增殖情况通过对培养1、3和5天后的成骨细胞的MTT试验来说明。使用半定量实时逆转录聚和酶联反应来测定接种培养3天和5天后MC3T3-E1细胞一系列成骨相关基因的表达,包括成骨细胞特异转录因子—核心结合蛋白α(Cbfa-1),成骨细胞特异基因(osterix),骨涎蛋白(bone sialoprotein),Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ),骨钙素(osteocalcin)和碱性磷酸酶—2(alkaline phosphatase-2)。通过它们的变化来观察SAHT表面对成骨细胞MC3T3-E1分化的影响。实验结果表明,喷砂和双酸蚀后的粗糙纯钛金属表面使用H2O2/HCl溶液和400℃加热一小时处理能在钛片表面形成一个多级孔洞粗糙的表面层,较之光滑和喷砂双酸蚀的粗糙钛片表面可以增强成骨细胞在材料表面的贴附,促进细胞骨架的早期伸展,影响成骨细胞的分化和成熟。因此在喷砂和双酸蚀的粗糙钛金属表面使用H2O2/HCl溶液和400℃加热一小时处理后形成的多级孔洞的二氧化钛凝胶层能提高成骨细胞的生物活性,该种植体表面改性方法可能有效提高种植体的骨整合能力。
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