磁性Fe3O4/SiO2载体表面的氨基修饰和漆酶固定化研究

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漆酶是一种多铜蛋白,具有较强的氧化能力,可以氧化降解酚类、芳香胺类、多环芳烃及对应的衍生物等多种难降解的有机污染物。因此,漆酶在工业有机污水的治理方面具有重要应用价值。相对于游离漆酶,固定化漆酶在酶的回收、重复利用和稳定性的改善方面具有很大优势。目前已经有很多载体,如活性炭、二氧化硅、聚苯乙烯微球、壳聚糖等,在漆酶的固定化方面得到了很好的应用。磁性材料是一种新型的漆酶固定化材料,通过外磁场就可实现漆酶与体系的快速分离,操作程序简单,操作成本低廉,有很好的应用开发前景。为此,人们将磁性材料Fe3O4等引入固定化载体,并通过共价-偶联的方法进行漆酶的固定化研究。本文以超顺磁性Fe3O4/SiO2纳米粒子为载体担载游离漆酶,以期实现漆酶的稳定固载和快速分离。磁性Fe3O4/SiO2载体表面的功能基团是羟基,为了与游离漆酶稳定键合,需要将载体进行氨基修饰,使其表面含有功能基团氨基。在进行氨基修饰的过程中,氨基修饰的条件和氨基数量影响着漆酶的固定化和酶活回收率。在已报道的文献中多采用甲苯,甘油等有机溶剂并在高温条件下进行,我们试图在较温和条件下实现磁性载体的氨基修饰,采用乙醇/水体系在室温条件下对载体表面进行氨基修饰,考察了APTES的用量和反应温度对固载后酶活回收率的影响,从而优化氨基修饰条件,然后以戊二醛为交联剂进行漆酶的固定化,探索了固定化漆酶的最适条件,并进行了酶学性质和催化性能的研究。通过透射电子显微镜(TEM)、红外吸收光谱(FTIR)和紫外-可见吸收光谱(UV-Vis)等手段对固载前后的样品进行表征。结果表明,在较温和条件下实现了对磁性载体的氨基修饰,漆酶在磁性Fe3O4/SiO2载体上成功固载,具有较高的操作稳定性,最佳固载条件为:磁性Fe3O4/SiO2载体100 mg,戊二醛浓度为2.5 %,固定化时间确定为10 h,初始漆酶浓度为0.6 mg/ml时,酶活回收率力最大55.2 %。漆酶固载前后反应最适pH和最适温度没有发生变化,固定化漆酶具有良好的操作稳定性,且固载后的漆酶能够降解普施安偶氮染料,20℃反应2 h的脱色率为54.7 %,加入介体ABTS后,脱色时间缩短为30 min,脱色率达到84 %,说明ABTS对漆酶降解普施安染料有明显的促进作用。
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