接骨木叶总黄酮提取纯化工艺优化及各极性部位抗氧化活性研究

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接骨木为忍冬科接骨木属植物,既是药食同源植物又是观赏植物,其根、茎、叶及果实均可供药用,具有悠久的入药历史。接骨木叶含有天然类黄酮化合物,具有显著的抗氧化、杀菌及抗肿瘤等疗效。本论文对接骨木叶类黄酮化合物的提取及其过程工艺进行优化,并对不同极性溶剂萃取部位提取黄酮的各有效成分以及抗氧化能力进行对比分析和讨论,以聚酰胺树脂对提取的乙酸乙酯萃取部位粗黄酮进行分离纯化。  (1)在单因素试验基础上,利用响应面法优化了超声辅助提取接骨木叶片总黄酮的最佳工艺条件,确定为:乙醇体积分数70%,料液比1:40,提取温度70℃,提取时间60min,在此条件下,总黄酮最高提取率可达18.67%。  (2)分别采用乙酸乙酯、氯仿、正丁醇3种不同极性溶剂对所提黄酮进行了分级萃取,得到乙酸乙酯、氯仿、正丁醇、水相四种不同极性萃取部位。应用蒽酮硫酸法、酒石酸亚铁法、香草醛-冰醋酸高氯酸法对不同极性萃取部位中多糖、多酚、皂苷3种有效成分相对含量测定,并与所得黄酮含量进行对比,得出各极性萃取部位的有效成分中黄酮含量最高,而黄酮含量尤以乙酸乙酯萃取部位最高,达54.3%。  (3)通过DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子3种方法来评价接骨木叶片四种不同极性萃取部位(乙酸乙酯、氯仿、正丁醇、水)中黄酮的抗氧化活性。实验结果表明:四种极性萃取部位对各自由基均有一定的清除活性,但均以乙酸乙酯萃取物的清除活性最高,说明接骨木叶片乙酸乙酯萃取物是从接骨木叶片中分离天然抗氧化剂的最佳部位。  (4)由于乙酸乙酯萃取部位黄酮含量最高,且抗氧化活性最强,故对此部位粗黄酮进行分离、纯化。通过对 X-5、硅胶、D101、AB-8、聚酰胺、D-4020六种大孔吸附树脂的静态吸附、解吸效果进行研究,筛选出了聚酰胺树脂具有较好的吸附和解析能力,它的吸附率高达63.31%,解吸率为57.24%,是对乙酸乙酯萃取部位类黄酮进行分离纯化的最佳树脂;进而对聚酰胺树脂纯化乙酸乙酯萃取部位类黄酮的条件进行优化,得出:上样量与吸附剂比例为1:75,洗脱剂乙醇浓度40%;按此工艺条件下通过扩大上样量与吸附剂用量进行试验显示,该工艺条件适用于进一步扩大化纯化接骨木叶片乙酸乙酯萃取物总黄酮。
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