家蚕再生丝素蛋白管状支架的制备及性能研究

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小口径人造血管近年来一直是研究的重要课题,如何解决小口径人造血管力学性能不足及凝血问题是关注的焦点。本文采用冷冻、风干方法,选择具有良好生物相容性的家蚕再生丝素蛋白(以下简称丝素蛋白)与作为交联剂的聚乙二醇双环氧丙烷醚(PEG-DE)复合作为内膜和外膜、以蚕丝编织物作为中膜、模拟天然血管组织结构构建直径小于6mm的丝素蛋白管状支架。详细探索了交联比例(SF:PEG-DE,w/w)、SF浓度和冷冻温度对管状支架制备的影响,研究了管状支架的形态结构,评价了PEG-DE作为交联剂的丝素蛋白复合材料的细胞毒性。进一步研究了管状支架对SD大鼠成纤维细胞(L929)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的生长支持作用。以SF:PEG-DE=1:0.2~1:1.5制备的丝素蛋白管状支架,随着交联比例中PEG-DE比重的增加,管状支架成型更佳,管状支架丝素蛋白结合率增加,当SF:PEG-DE=1:1时管状支架成型最好,丝素蛋白管状支架中未交联的丝素蛋白溶失最少,丝素蛋白分子充分发生了交联反应,交联程度达到最佳,支架内表面微孔分布均匀。随着丝素蛋白浓度由3%增加到6%,管状支架成型更佳,丝素蛋白结合率上升,壁厚增加,孔径变小。丝素蛋白浓度为3%时,管状支架内表面不能形成良好内膜。随着冷冻温度(-20℃、-40℃、-80℃)的下降,管状支架孔径增大,孔壁因疏松使壁厚略有增加,对管状支架中丝素蛋白的结合率没有影响。制备的丝素蛋白管状支架松弛外径约4.4~4.7mm,松弛内径为3.0~3.2mm,壁厚<1mm,弯折直径5.8~6.7mm,具有较好的弯曲性能。丝素蛋白管状支架的轴向拉伸断裂强度>90MPa,轴向拉伸断裂伸长率>84%,径向拉伸断裂强度>1000MPa,断裂伸长率>160%,同时具有良好的径向压缩回复率。结果表明,本文制备的管状支架具有非常优越的力学性能。另外,丝素蛋白管状支架在37℃中的热水溶失率<1%。MTT和细胞DNA总含量分析结果显示,以PEG-DE作为交联剂制备的丝素蛋白复合材料没有明显细胞毒性,L929细胞在共混膜上呈长梭形,铺展紧密,细胞增殖活性强。采用荧光倒置显微镜、SEM、激光共聚焦显微镜观察及MTT法测试结果显示,丝素蛋白管状支架能很好的支持L929细胞的粘附和增殖。进一步研究了HUVECs在管状支架内表面的生长,同样显示了良好的粘附和增殖。
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