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目的:观察NO供体JS-K对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝癌的抑制作用及其对MEK/ERK信号通路的调控作用,进一步探讨其抗肝癌的作用机制。方法:将60只Wistar雄性大鼠,随机分为正常对照组、DEN模型组、阳性组、低剂量药物组和高剂量药物组,每组12只。除正常对照组外,其余组均腹腔注射DEN 50mg/kg(10m L/kg),每周2次,4周后DEN改为每周1次,同时阳性组腹腔注射氟尿嘧啶5mg/kg,药物组分别按0.25mg/kg和0.5mg/kg(5m L/kg)尾静脉注射,每周2次。正常对照组按10m L/kg剂量腹腔注射生理盐水。第8周与第12周每组随机处死一只大鼠,给药至16周处死,观察肝脏外观,记录终末体重及计算肝脏指数;比色法测定血清中白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、羟脯氨酸(HYP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)水平;ELISA检测甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)和异常凝血酶原(APT)水平;HE染色法观察大鼠肝组织的病变程度;Masson胶原纤维染色和银染法观察肝组织纤维化程度;免疫组织化学法检测肝组织中PCNA、p-ERK、Cleaved caspase-3蛋白的表达;Western blot蛋白印迹法检测肝组织中Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、p-ERK、p-MEK、p-p90RSK蛋白水平。结果:1正常对照组大鼠肝脏表面完整光滑,呈灰红色,结构完整;DEN模型组大鼠肝脏存在明显的巨瘤块和坏死灶,结构严重被破坏;低、高剂量药物组上述情况明显减轻;与正常对照组相比,DEN模型组大鼠的肝脏指数明显增加,约为正常对照组大鼠肝脏指数的2.1倍;与DEN模型组相比,药物低、高剂量组肝脏指数明显降低(P<0.01)。与正常对照组相比,DEN模型组大鼠的终末体重明显降低(P<0.01);与DEN模型组相比,阳性组与药物高剂量组终末体重明显升高(P<0.01)。2血清学检测结果显示:与正常对照组相比,DEN模型组大鼠血清中TBIL、ALT、AST、ALP、AFP、AFP-L3、APT、HYP、γ-GT的水平均明显升高,TP、Alb的水平均明显降低(P<0.01);与模型组相比,药物低、高剂量组TBIL、ALT、AST、ALP、AFP、AFP-L3、APT、HYP、γ-GT的水平明显降低(P<0.01),TP、Alb的水平均明显升高(P<0.01)。3 HE染色和胶原染色结果显示:(1)正常对照组大鼠肝组织无明显的纤维化、胶原聚集和癌巢病变;与正常对照组相比,DEN模型组正常肝小叶结构被破坏,出现核内空泡现象,胞浆稀少;与DEN模型组相比,药物低、高剂量组镜下可见肝小叶结构相对较好,癌细胞分化程度高。(2)Masson染色结果显示:正常对照组大鼠肝组织几乎未见Masson阳性着色;与正常对照组相比,DEN模型组肝组织中蓝染部分代表的胶原纤维明显增加;与DEN模型组相比,药物低、高剂量组蓝染部分代表的胶原纤维明显减少,胶原纤维化程度减轻。(3)银染法结果显示:正常对照组大鼠肝组织几乎未见黑褐色网状纤维;与正常对照组相比,DEN模型组肝组织中黑褐色网状纤维明显增加;与DEN模型组相比,药物低、高剂量组网状纤维明显减少,网状纤维化程度明显减轻。4免疫组化结果显示:与正常对照组相比,DEN模型组可见大量的PCNA、p-ERK阳性染色,偶见Cleaved caspase-3阳性着色;与DEN模型组相比,药物组明显减少了PCNA、p-ERK的表达,增加Cleaved caspase-3的表达。5 Western blot结果显示:JS-K上调Bax和Cleaved caspase-3表达,下调Bcl-2、p-ERK、p-MEK和p-p90RSK的表达。结论:1分别从肝脏表面观、肝脏指数、血清生化指标、组织病理学改变等方面证实了一氧化氮供体JS-K对DEN诱发的大鼠肝癌具有抑制作用。2 JS-K通过上调Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2、p-ERK、p-MEK和p-p90RSK的蛋白表达抑制大鼠肝癌。