论文部分内容阅读
目前，病毒性肝炎、酒精及药物中毒性肝病、各种肝损伤以及随之而来的肝纤维化、肝硬化、肝功能衰竭等已成为严重危害人类健康的常见疾患。然而，至今尚缺少低毒、高效的肝病防治药物。
榄仁（Terminalia catappa L.）为使君子科诃子属植物，广泛分布于热带和亚热带地区，在台湾、印度及东南亚地区民间盛行使用其落叶预防和治疗肝脏疾病。研究显示榄仁叶具有肝脏保护作用，但其有效部位及其作用机制尚未阐明。长期以来，对榄仁叶的药理学研究一直集中在鞣质部分，对其它成分的研究甚少。
论文分为两部分。第一部分对榄仁叶醇提物进行活性导向性分离，纯化、鉴定其保肝作用的有效成分。首先采用不同极性的有机溶剂对榄仁叶醇提物进行萃取，得到5个组分：石油醚部位、氯仿部位（chloroform fraction of the ethanol extract of Terminalia catappa L.leaves，TCCF）、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位。接着，运用CC1<，4>诱导的小鼠急性肝损伤以及D－GalN诱导的原代小鼠肝细胞损伤两个模型，比较了榄仁叶醇提物的5个萃取部位对抗肝损伤的效力，发现TCCF能明显对抗CCl<，4>诱导的小鼠血清丙氨酸转移酶和天冬氨酸转移酶活力及肝组织丙二醛含量的升高，显著改善损伤小鼠的肝组织结构，且随着剂量的增加，阻断肝损伤的能力增强。运用D-GalN损伤模型进行研究亦获得了类似的结果。同时还发现，TCCF的保肝降酶作用明显强于其它4个组分。因此，TCCF是榄仁叶醇提物的主要活性部位。随后采用柱层析技术，以极性溶剂洗脱，首次分离、鉴定出其三萜类的两个单体化合物——乌苏酸和亚细亚酸。鉴于三萜类在TCCF中含量丰富以及公认的三萜类物质的护肝作用，推测乌苏酸和亚细亚酸可能为TCCF发挥肝脏保护作用的有效成分。
第二部分着重探讨TCCF及其有效成分的护肝机制。形态学观察和线粒体功能检测发现，TCCF能剂量依赖性预防CCl<,4>损伤小鼠肝线粒体肿胀、嵴断裂，线粒体内游离钙浓度升高以及线粒体膜电位降低等病理变化，表明TCCF对损伤小鼠的肝线粒体有明显保护作用。而TCCF影响线粒体对钙诱发肿胀的敏感性这一结果则提示该组分可能参与肝脏线粒体膜通透性转运孔功能的调节。采用高钙诱导正常离体肝脏线粒体高通透性转运模型，进一步发现TCGF的有效成分乌苏酸及亚细亚酸均能显著对抗肝脏线粒体高通透性转运过程，抑制线粒体内细胞色素C及凋亡诱导因子的释放。而且亚细亚酸可阻止损伤引起的肝线粒体内细胞色素C的释放及线粒体膜通透性转运孔主要组成成分——电压依赖性阴离子通道蛋白的下调，提示TCCF可通过其有效成分乌苏酸及亚细亚酸上调电压依赖性阴离子通道蛋白、抑制线粒体膜通透性转运孔的开放、阻止细胞凋亡或坏死的启动，发挥其保护肝脏线粒体、对抗肝损伤的作用。此外，还发现，17CCF可有效阻断CCl<,4>诱导的肝脏IL-6 mRNA和蛋白水平的升高，且乌苏酸和亚细亚酸均有较强的抗氧化活性，亚细亚酸的作用强于乌苏酸。
综上所述，本文首次发现TCCF。是榄仁叶醇提物的主要活性部位；首次分离鉴定出其三萜类的两个单体——乌苏酸和亚细亚酸；首次发现亚细亚酸具有抗氧化和肝脏保护功能；首次阐明肝损伤时线粒体膜通透性转运孔的功能发生改变，而药物可以调节线粒体膜通透性转运孔功能，直接保护肝脏线粒体而发挥其护肝作用。提出TCCF的护肝机制包括三个方面：（1）通过上调电压依赖性阴离子通道蛋白、抑制线粒体膜通透性转运孔的开放保护肝脏线粒体；（2）抑制肝脏IL-6的过度表达；（3）直接清除自由基，发挥抗氧化作用。总之，上述研究除证实乌苏酸和亚细亚酸是TCCF发挥肝脏保护作用的有效成分，亦提示线粒体膜通透性转运孔可以作为肝脏保护药物的新靶点，用于药物筛选和药效评价，此外还预示了亚细亚酸作为新一代护肝候选药物的应用前景。