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目的:构建血管紧张素Ⅱ相关新基因BC097361的原核表达载体,诱导BC097361基因的融合蛋白表达,并对其进行纯化,制备兔抗BC097361融合蛋白多克隆抗体并进行鉴定,从而探讨该基因在肝纤维化发生中的作用。方法:1.应用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription PCR,RT-PCR)技术,以大鼠肝星状细胞系LX02细胞提取的总RNA为模板,扩增目的基因BC097361,克隆至pGEM-T载体,测序正确后将目的基因插入原核表达载体pET-32a(+)中,并使其与载体中的His标签在同一读码框内,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导融合蛋白表达,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析、免疫印迹Western blotting分析证实融合蛋白表达的特异性。再利用亲和层析法对表达蛋白进行纯化及柱上复性。2.纯化的His-BC097361融合蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗该融合蛋白的多克隆抗体。以纯化的融合蛋白为抗原,同时以免疫前后的兔血清作为一抗,利用Western blotting技术和ELISA方法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。3.选用鉴定正确的多克隆抗体以免疫组织化学方法和Western blotting方法分别检测BC097361蛋白在大鼠肝纤维化组织中的表达以及分析在血管紧张素Ⅱ刺激下LX02细胞中BC097361相关蛋白的表达。结果:1.成功构建BC097361的原核表达载体pET-32a(+)-BC097361,转化BL21表达菌,IPTG诱导表达BC097361融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting分析得到证实。2.纯化BC097361融合蛋白并成功制备兔抗BC097361多克隆抗体。ELISA检测证实该抗体效价＞1:320000,Western blotting、免疫组织化学检测证明该抗体有较好的特异性。3.利用多克隆抗体行Western blotting检测及免疫组织化学技术证实:血管紧张素Ⅱ作用的LX02细胞及大鼠肝纤维化组织中BC097361相关蛋白表达明显上调。结论:1.利用大肠埃希菌BL21(DE3)可以成功表达BC097361蛋白。2.纯化的BC097361融合蛋白免疫新西兰兔,获得高特异性、高效价多克隆抗体,为今后研究该蛋白的生物学特性奠定了基础。3.血管紧张素Ⅱ作用的LX02细胞和大鼠肝纤维化组织中均可检测到BC097361蛋白的表达明显增加。