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动脉粥样硬化(Artherosclerosis, AS)作为一种慢性炎症性疾病,已经成为世界范围内死亡率最高的疾病之一。巨噬细胞能启动脂质条纹形成,在动脉粥样硬化病理过程中具有重要作用。脂质条纹主要由巨噬细胞源泡沫细胞构成,而巨噬细胞泡沫化则是由胞内脂质代谢及转运紊乱导致。巨噬细胞胆固醇稳态的调控涉及多种因子,包括清道夫受体、参与胆固醇代谢的酶类以及胆固醇转运蛋白,如ATP结合盒转运蛋白(ABCA1、ABCG1和ABCG4等)和清道夫受体B1(scavenger receptor B1, SR-B1)。巨噬细胞质膜上的清道夫受体包括清道夫受体A(scavenger receptor A, SR-A)和CD36,他们可以介导修饰脂质特别是氧化LDL(ox-LDL)的摄取。ox-LDL在溶酶体中降解为游离胆固醇或被修饰成无活性的胆固醇酯。ABCA1能够将胞内过剩的游离胆固醇传递给apoA-I或apoE,从而促进胆固醇外流,抑制巨噬细胞泡沫化。增加ABCA1的表达具有抗AS作用。近几年研究显示,过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ, PPARγ)和核因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)在调控巨噬细胞炎症和胆固醇稳态方面发挥着重要作用。作为一种重要的炎症因子,肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)很可能具有调控泡沫细胞ABCA1表达的功能。本实验主要研究促炎因子TNF-α对ABCA1表达的调控作用,并且阐述PPARγ与NF-κB之间是否存在相互作用、参与TNF-α对ABCA1表达的调控。分离并纯化TNF-α~-/-型和野生型(WT型)C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞,与50μg/ml ox-LDL孵育48h以诱导巨噬细胞泡沫化。实验分为两组对照组,一组泡沫细胞仅添加外源TNF-α(10ng/ml)处理24h,另一组使用ox-LDL(50μg/ml)和TNF-α(10ng/ml)共同处理24h。应用荧光免疫组织化学方法研究TNF-α对巨噬细胞源泡沫细胞内ABCA1表达的影响,以及该过程可能涉及的信号通路间的相互作用。实验结果显示:未泡沫化前,TNF-α~-/-型小鼠腹腔巨噬细胞内ABCA1表达量极少,与WT型无明显差别。加入ox-LDL诱导泡沫化后, ABCA1表达量明显增加,但两种基因型之间无明显差别。在泡沫细胞中加入外源TNF-α后,ABCA1表达量明显下降,因而推测TNF-α对ABCA1表达的抑制作用与TNF-α浓度相关。巨噬细胞NF-κB的表达量在泡沫化后无显著增加,向泡沫细胞中添加TNF-α可激活NF-κB核易位,ox-LDL对NF-κB核易位也有一定刺激作用。ox-LDL可刺激PPARγ的表达和核易位,并且这种作用与时间呈正相关;TNF-α对泡沫细胞PPARγ的激活有一定抑制作用,但并不显著。TNF-α可通过激活NF-κB通路显著降低泡沫细胞中ABCA1表达水平,但PPARγ并不能逆转NF-κB对ABCA1表达的抑制作用。以上结果显示TNF-α可能通过NF-κB途径下调泡沫细胞ABCA1表达,而PPARγ对泡沫细胞ABCA1表达似乎没有明显影响。