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研究目的近年来,中医药在化疗后骨髓抑制的治疗上发挥着积极的作用,也引起了越来越多的关注和研究。补肾填精中药可通过不同机制促进干细胞增殖、分化,可以减缓干细胞衰老性变化。根据课题组前期提出的“干细胞具有先天之精的属性,是先天之精在细胞层次的存在形式”,本课题将观察顺铂化疗导致干细胞的损伤性表现,探讨补肾法调控骨髓干细胞拮抗化疗引起骨髓抑制的效应机制,为临床有效防治放化疗导致骨髓抑制提供选方依据和思路。在课题组前期研究的基础上,筛选出对骨髓间充质干细胞增殖有促进作用的单味中药、中药单体,分析它们对顺铂引起MSCs损伤的保护作用,为阐释其拮抗化疗引起骨髓抑制的作用机理提供实验依据,也为“精”的干细胞学说提供了充分的科学依据。研究方法1.细胞实验（1）全骨髓贴壁法分离、培养骨髓间充质干细胞。（2）CCK-8法筛选对顺铂引起MSCs损伤具有保护作用的单味中药、中药单体,并研究它们最佳作用时间与浓度。（3）用顺铂物质的量浓度为12.97μM（顺铂对MSCs IC50值）与何首乌含药血清及二苯乙烯苷（THSG）共培养诱导MSCs 72h后,流式细胞术测细胞凋亡;成骨和成脂诱导分化检测,Real-Time PCR检测相关细胞因子mRNA表达。2.动物实验（1）生物信息数据挖掘顺铂作用大鼠骨髓差异基因的表达。（2）造模:参照细胞毒性抗肿瘤药临床前评价方法,取100gSD雄性大鼠,按照4.5mg/kg尾静脉注射顺铂,复制骨髓抑制模型。（3）分组:将实验大鼠随机分为3组,每组10只,分为正常组、模型组、THSG组。（4）给药方法:THSG组:第一天早上8点按照4.5mg/kg尾静脉注射顺铂一次性骨髓抑制造模,下午4点二苯乙烯苷(浓度为1×10m-4ol/L)灌胃,每天灌胃一次,连续7天。模型组:第一天早上8点按照4.5mg/kg尾静脉注射顺铂一次性骨髓抑制造模,每天生理盐水,连续7天。对照组第1到7天每天生理盐水灌胃。（5）相关指标监测（1）血常规:正常组、模型组和实验组分别于第2天、5天、8天眼球后静脉取血上机血常规检测。（2）流式细胞仪检测细胞周期,及骨髓干细胞CD105阳性细胞的检测。（3）多向分化检测,Real-time PCR检测细胞周期Cdkn1a Ccne1基因表达。结果1.细胞实验（1）25%何首乌含药血清及1×10-4mol/L THSG与顺铂共培养72小时后,对MSCs的增殖有显著的促进作用（P<0.05）。（2）25%何首乌含药血清、1×10-4mol/L THSG与顺铂分别共培养MSCs72小时,能够减缓顺铂诱导MSCs早期细胞的凋亡（P<0.05）。（3）25%何首乌含药血清、1×10-4mol/L THSG对顺铂诱导MSCs成骨分化损伤具有一定的保护作用,并可以促进成骨相关标志基因ALPL、OGN的表达;25%何首乌含药血清、1×10-4mol/L THSG对顺铂诱导MSCs成脂分化损伤具有一定的保护作用,并可以促进成脂相关标志基因LPL、CFD的表达.2.动物实验（1）化疗后第8天,1×10-4mol/L THSG对骨髓抑制模型外周血白细胞计数与显著的提高作用（P<0.05）,对红细胞与血小板的改善不明显（P>0.05）。（2）化疗后第8天与对照组相比,模型组细胞周期S期所占比例显著性增加,但是THSG组与对照组相比,无显著性差异,THSG组与模型组相比细胞周期S期所占比例明显降低,有显著性差异（P<0.05）;化疗后第5天与对照组比较,THSG组、模型组有显著性差异（P<0.01）,THSG组与模型组相比较CD105细胞有显著性差异(P<0.050。（3）化疗后第5天与对照组相比,THSG组、模型组中CDKN1A基因的表达都有显著差异（P<0.05）,THSG组与模型组相比CDKN1A基因的表达有显著差异（P<0.05）;化疗后第8天对照组相比,THSG组CCNE1基因表达上调,有显著性差异（P<0.05）,THSG组与模型组相比CCNE1基因表达上调,有显著性差异（P<0.05）。结论1.25%何首乌含药血清及1×10-4mol/L THSG与顺铂共培养MSCs72小时后,能够显著促进MSCs的增殖;能够减缓顺铂诱导MSCs早期细胞的凋亡;对顺铂诱导MSCs成骨、成脂分化损伤具有一定的保护作用,并可以促进成骨、成脂相关标志基因ALPL、OGN、LPL与CFD的表达。2.1×10-4 mol/L二苯乙烯苷可以促进骨髓抑制模型中骨髓干细胞的增殖,减轻细胞周期S期阻滞,提高化疗后外周白细胞的计数,其作用机制可能与THSG抑制骨髓抑制模型中CDKN1A基因的过表达,上调CCNE1基因的表达有关。