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背景:舌鳞癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤。临床上具有生长快、浸润性强、有较高的复发率、淋巴转移率高、预后较差等特点。其在口腔鳞状细胞癌中构成比最高,我国约占32.3%,欧美国家报道在21%-52%之间。舌鳞癌为上皮源性肿瘤,具有较高的区域性淋巴转移率,颈部区域淋巴结的转移高达38.07%。研究表明在其仍为原位癌时,在许多正负调控因子的相互作用下就开始了新生脉管的形成,供应肿瘤生长所必需的氧气和营养物质。但至今舌鳞癌诱导淋巴管生成的分子机制,以及其新生淋巴管与淋巴道转移间的确切关系尚不甚明确。淋巴内皮生长因子-D(VEGF-D)是血管内皮生长因子(VEGF)家族的一个成员,是近年来新发现的促淋巴管生长因子。VEGF-D在人类肿瘤中的表达及其意义研究结果不尽一致。VEGF-D必须和相应的受体结合才能发挥其促进微淋巴管生成的作用,VEGF-D/VEGFR-3与肿瘤淋巴道转移的关系,特别是在舌鳞癌中的作用尚待证实。以往对肿瘤淋巴管生成的研究因为缺乏淋巴管内皮细胞特异性标记物,仅依靠普通的HE染色技术很难将它们在形态学上与毛细血管截然区分,因此对肿瘤新生淋巴管生成的研究远远滞后于对肿瘤新生血管生成的研究。近年来,虽然淋巴管内皮透明质酸受体(LYVE-1)等一些淋巴管内皮细胞标记物陆续被发现,但多项研究证实这些常用标记物不仅在淋巴管内皮细胞中表达,而且在血管内皮细胞中也有表达,影响了在形态学上对肿瘤微淋巴管和肿瘤微血管的区分。1999年Marks等发现的D2-40分子,是一种可以和胚胎睾丸细胞膜及干细胞膜表面的癌胚抗原M2A(一种分子量为40KD的0链唾液酸糖蛋白)发生特异性免疫反应的单克隆抗体。最新的研究发现D2—40在淋巴管内皮细胞上有固定的抗原决定簇,可以用来标识恶性黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、肾细胞癌等多种肿瘤的新生微淋巴管,在有管壁平滑肌的成熟淋巴管和微血管内皮上没有表达,因此成为一种新的淋巴管内皮特异性标记物。目的:探讨舌鳞癌组织中VEGF-D(淋巴管内皮生长因子-D)及其受体VEGFR-3(血管内皮生长因子受体-3)的表达。采用D2—40标记舌鳞癌组织中的淋巴管并计数肿瘤淋巴管密度(LVD)。分析VEGF-D、VEGFR-3与舌鳞癌中淋巴管生成、分布、密度及相关临床病理因素之间的关系。推断VEGF-D/VEGFR-3/LVD在舌鳞癌淋巴转移中的作用。材料和方法标本来源,实验组为2005～2006年郑州大学第一附属医院口腔颌面外科舌鳞癌患者术后标本69例(所有患者均术前未行放疗和化疗,术后正规治疗);对照组为正常舌黏膜组织标本20例。所取组织均经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,5μm连续切片,进行组织病理学检查。采用免疫组织化学法,检测舌鳞癌患者手术切除标本中VEGF-D、VEGFR-3和D2-40的表达情况。统计方法:采用SPSS13.0统计软件进行数据处理,α=0.05。其中VEGF-D和VEGFR-3的表达以及与临床病理参数之间的关系采用卡方检验,LVD与VEGF-D、VEGFR-3的表达以及与临床病理参数之间的关系采用t检验及F检验。结果:1、VEGF-D的免疫组化结果:正常舌黏膜存在少量VEGF-D表达,主要位于上皮细胞胞浆。阳性3例(阳性率为15.00%)。舌鳞癌组织中VEGF-D表达主要位于肿瘤细胞的胞浆。阳性30例(阳性率为43.48%),与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)。37例淋巴结转移组中,VEGF-D阳性22例(阳性率59.46%),32例无淋巴结转移组中VEGF-D阳性8例(阳性率25.00%),二者差异显著(P＜0.05)。VEGF-D的表达与年龄、肿瘤大小、病理分型无关(P＞0.05)。2、VEGFR-3的免疫组化结果:VEGFR-3在正常组织中有4例表达阳性(阳性率为20.00%)。舌鳞癌中VEGFR-3表达位于肿瘤周围淋巴管内皮细胞,在肿瘤细胞胞浆中也有阳性表达,但其在肿瘤组织的表达主要集中在肿瘤外周。在舌鳞癌中有44例呈阳性表达(阳性率为63.77%)。37例淋巴结转移组中,VEGFR-3阳性30例(阳性率81.08%),32例无淋巴结转移组中VEGFR-3阳性14例(阳性率43.75%),二者差异显著(P＜0.05)。肿瘤细胞VEGFR—3的阳性表达和VEGF-D阳性表达之间有显著的相关性(P＜0.05)。与淋巴转移也具有显著相关性。3、D2-40的免疫组化结果:正常黏膜的D2-40阳性染色的淋巴管很少且散在分布,计数微淋巴管密度值为6.23±0.23。光镜下见舌鳞癌组织中D2-40阳性染色的淋巴管大部分位于肿瘤间质组织内,在肿瘤组织内部也有少量淋巴管。特征为管壁薄,管腔大小不一,形态不规则,舌鳞癌中淋巴管密度为33.24±0.09。两者差异显著(P＜0.05)。非淋巴结转移组淋巴管密度为27.56±0.05。淋巴结转移组淋巴管密度为38.15±0.35。两者差异显著(P＜0.05)。结论:1、VEGF-D在正常组织中低表达,在舌鳞癌中高表达,与淋巴结转移相关。与年龄、肿瘤大小、病理分型无关。2、VEGFR-3在正常组织或舌鳞癌组织中都有表达,但在舌鳞癌中高表达。其高表达和肿瘤细胞中VEGF-D的阳性表达有显著的相关性(P＜0.05),和淋巴结转移也具有显著的相关性(P＜0.05)。3、正常舌黏膜组织和舌鳞状细胞癌组织中均可见D2-40阳性表达的淋巴管,但舌鳞状细胞癌组织中淋巴管密度明显高于正常黏膜组织。说明舌鳞状细胞癌组织中具有更丰富的淋巴管,但分布存在异质性。淋巴管主要分布于肿瘤间质组织内、管壁薄、管腔大小不一、形态不规则。肿瘤淋巴管密度(LVD)与淋巴结转移等相关,其LVD的增加可能与舌癌的侵袭及转移相关。4、由以上可以推测,VEGF-D/VEGFR-3可促进肿瘤淋巴管生成,是肿瘤经淋巴道侵袭转移的重要调控系统之一,淋巴管数目的增多使癌细胞更易于侵入淋巴管从而促进淋巴结转移,导致生存期缩短。舌鳞癌组织中的VEGF-D/VEGFR-3/LVD联合检测可作为评估舌鳞癌淋巴结转移的一项辅助指标,并为舌癌患者判断预后及确定临床治疗方案提供实验和理论依据。