洋葱中活性寡糖的提取分离纯化工艺研究及结构表征

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洋葱(AIliumcepaL.)为百合科(Liliaceae)葱属(AIlium)植物。具有很高的营养价值和较广泛的药理活性,为药食两用蔬菜。本文以洋葱为原料,对洋葱中的寡糖进行了提取和纯化并对其结构进行了研究。   本实验以新鲜黄皮洋葱为原料,采用水提法提取洋葱寡糖,运用硫酸-蒽酮比色法测定寡糖含量。比较了料液比、提取温度和提取时间对洋葱寡糖提取率的影响,并以料液比、提取温度和提取时间为考查因素,采用k(3)正交实验优化了水提法提取洋葱寡糖的最佳工艺,当提取时间为80min,提取温度为70℃,液料比为1∶4时寡糖的提取率是70.19%。再采用活性炭脱色、Sevag法除蛋白、乙醇沉淀,凝胶柱层析法等对寡糖进行分离纯化,当活性炭用量为2.5g/L,脱色时间20min,脱色温度70℃,脱色率为85.48%,寡糖回收率为85.13%。以葡聚糖凝胶SephadexG-25柱层析纯化分级,得到的寡糖成分经鉴定为单一纯品,寡糖回收率为71.35%,纯度为99.61%。   采用活性炭作脱色剂,对黄皮洋葱寡糖进行脱色工艺研究。以活性炭用量、脱色时间、脱色温度为影响因素,以脱色率、寡糖回收率为衡量指标,通过单因素实验和正交优化实验得到最佳脱色工艺为:活性炭用量2.5g/L,脱色时间10min,脱色温度70℃时,脱色率为85.48%,洋葱寡糖的回收率为85.13%。   采用物理和化学分析方法研究了洋葱寡糖的理化性质,并通过HPLC,ESI-MS,UV,IR,1HNMR,13CNMR,HMQ,HMQC,1H-1HCOSY和HMBC谱等对洋葱寡糖的纯度、结构和组成进行研究。结果表明,洋葱中有二糖,三糖和四糖三种寡糖,寡糖中的单糖组成有果糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为1∶3∶1;并确定了洋葱寡糖二糖和三糖的结构,二糖的结构是Frufβ(2→6)Glcpα;三糖的结构是Frufα(2→6)Frufα(2→3)Galpβ。
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