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背景：
阿尔茨海默病（AD）是导致老年痴呆最常见的原因，目前为止其病因尚不完全清楚且没有有效的方法预防或治疗该病。因Aβ的体内外的神经毒性使其成为治疗预防AD的主要研究目标。Aβ接种AD转基因鼠时能够诱发明显的抗体反应同时减少鼠脑内Aβ的沉积。AN-1792进入Ⅱ期临床试验时部分病人出现严重的脑内炎症反应。进一步研究发现Aβ1-42的C末端有数个抗原决定簇与T细胞反应激活有关而N末段Aβ4-10片段含B细胞激活性抗原决定簇，当序列加上3号位氨基酸时与抗AB抗体的亲和性明显增强。
目的：
检测DNAAβ3-10重组入质粒pcDNA3.1+构建成pcDNA3.1+-（Aβ3-10）10-CpG疫苗，肌肉注射免疫BALB/c小鼠后诱导的免疫反应类型。
方法：
用内切酶EcoRI、NotI酶切pcDNA3.1+-（Aβ3-10）10-CpG，再用T4连接酶连接酶切产物构建pcDNA3.1+-（Ap3-10）10；用碱裂解法提取质粒pcDNA3.1+-（Aβ3-10）10-CpG、pcDNA3.1+-（Ap3-10）10；用所得质粒通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠，同时设阳性对照组（Aβ1-42蛋白）、阴性对照组（PBS）；分离完成免疫的小鼠脾细胞接种于96孔板中分别加入抗原[（Aβ3-10）10或Aβ1-42蛋白]或ConA5％CO2孵箱37℃培养44小时后MTT法侧细胞增殖反应，留取上清用ELISA法测细胞因子IL-4，IFN-γ的浓度；用SPSS软件对实验所得数据进行t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
结果：
脾细胞增殖反应结果：将调好浓度的脾细胞接种与96孔板上分别加入刺激物抗原或ConA培养44h后用MTT法测得细胞增情况，显示各组在相应抗原刺激后实验2组的增殖指数显著高于阴性组（P<0.05）；实验1组的增殖指数显著高于实验2组（P<0.05），；实验1组的刺激指数小于阳性对照组（Aβ1-42蛋白组）有显著差异（P<0.05）。ConA刺激各组显示实验2组刺激指数与阴性组无显著差异（P>0.05）；实验1组刺激指数显著高于实验2组（P<0.05），但显著低于阳性对照组（P<0.05）
细胞因子检测结果：检测脾细胞增殖反应所的细胞培养上清液中的IL-4、IFN-γ浓度显示相应抗原刺激的各组中实验2组的IL-4浓度显著高于阴性组（P<0.05），而IFN-γ浓度实验2组与阴性组无显著差异（P>0.05）；实验1组的IL-4浓度、IFN-γ浓度均显著高于实验2组（P<0.05），但IL-4浓度的差异更明显；实验1组的IL-4浓度、IFN-γ浓度均低于阳性对照组（P<0.05），但IL-4浓度差异更显著。ConA刺激的各组显示实验2组的IFN-γ浓度与阴性组无显著差异（P>0.05）；实验1组的IL-4浓度与实验2组无显著差异（P>0.05）而IFN-γ浓度存在显著差异（P<0.05）。
结论：
疫苗pcDNA3.1+-Aβ3-10-CpG免疫原性确实可靠，但小于Aβ1-42；疫苗诱导的反应类型以Th2反应为主；CpG序列以增强Th2反应为主，也能一定程度增强Th1反应。实验结果基本与实验预期相符，可将其作为阿尔茨海默病的候选疫苗，为转基因动物体内试验提供了依据，也为进一步研究主动免疫清除老年斑的机理奠定了基础，为阿尔茨海默病基因疫苗的研制提供了新的手段。
阿尔茨海默病（AD）是导致老年痴呆最常见的原因，目前为止其病因尚不完全清楚且没有有效的方法预防或治疗该病。因Aβ的体内外的神经毒性使其成为治疗预防AD的主要研究目标。Aβ接种AD转基因鼠时能够诱发明显的抗体反应同时减少鼠脑内Aβ的沉积。AN-1792进入Ⅱ期临床试验时部分病人出现严重的脑内炎症反应。进一步研究发现Aβ1-42的C末端有数个抗原决定簇与T细胞反应激活有关而N末段Aβ4-10片段含B细胞激活性抗原决定簇，当序列加上3号位氨基酸时与抗AB抗体的亲和性明显增强。
目的：
检测DNAAβ3-10重组入质粒pcDNA3.1+构建成pcDNA3.1+-（Aβ3-10）10-CpG疫苗，肌肉注射免疫BALB/c小鼠后诱导的免疫反应类型。
方法：
用内切酶EcoRI、NotI酶切pcDNA3.1+-（Aβ3-10）10-CpG，再用T4连接酶连接酶切产物构建pcDNA3.1+-（Ap3-10）10；用碱裂解法提取质粒pcDNA3.1+-（Aβ3-10）10-CpG、pcDNA3.1+-（Ap3-10）10；用所得质粒通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠，同时设阳性对照组（Aβ1-42蛋白）、阴性对照组（PBS）；分离完成免疫的小鼠脾细胞接种于96孔板中分别加入抗原[（Aβ3-10）10或Aβ1-42蛋白]或ConA5％CO2孵箱37℃培养44小时后MTT法侧细胞增殖反应，留取上清用ELISA法测细胞因子IL-4，IFN-γ的浓度；用SPSS软件对实验所得数据进行t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
结果：
脾细胞增殖反应结果：将调好浓度的脾细胞接种与96孔板上分别加入刺激物抗原或ConA培养44h后用MTT法测得细胞增情况，显示各组在相应抗原刺激后实验2组的增殖指数显著高于阴性组（P<0.05）；实验1组的增殖指数显著高于实验2组（P<0.05），；实验1组的刺激指数小于阳性对照组（Aβ1-42蛋白组）有显著差异（P<0.05）。ConA刺激各组显示实验2组刺激指数与阴性组无显著差异（P>0.05）；实验1组刺激指数显著高于实验2组（P<0.05），但显著低于阳性对照组（P<0.05）
细胞因子检测结果：检测脾细胞增殖反应所的细胞培养上清液中的IL-4、IFN-γ浓度显示相应抗原刺激的各组中实验2组的IL-4浓度显著高于阴性组（P<0.05），而IFN-γ浓度实验2组与阴性组无显著差异（P>0.05）；实验1组的IL-4浓度、IFN-γ浓度均显著高于实验2组（P<0.05），但IL-4浓度的差异更明显；实验1组的IL-4浓度、IFN-γ浓度均低于阳性对照组（P<0.05），但IL-4浓度差异更显著。ConA刺激的各组显示实验2组的IFN-γ浓度与阴性组无显著差异（P>0.05）；实验1组的IL-4浓度与实验2组无显著差异（P>0.05）而IFN-γ浓度存在显著差异（P<0.05）。
结论：
疫苗pcDNA3.1+-Aβ3-10-CpG免疫原性确实可靠，但小于Aβ1-42；疫苗诱导的反应类型以Th2反应为主；CpG序列以增强Th2反应为主，也能一定程度增强Th1反应。实验结果基本与实验预期相符，可将其作为阿尔茨海默病的候选疫苗，为转基因动物体内试验提供了依据，也为进一步研究主动免疫清除老年斑的机理奠定了基础，为阿尔茨海默病基因疫苗的研制提供了新的手段。