【摘 要】
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CRISPR是细菌和古生菌等原核生物细胞内的一种获得性免疫系统,用于抵抗病毒、质粒等外源遗传物质的入侵。近年来,由于其方便、快捷和高效的特点,CRISPR技术在生化学家中引起
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CRISPR是细菌和古生菌等原核生物细胞内的一种获得性免疫系统,用于抵抗病毒、质粒等外源遗传物质的入侵。近年来,由于其方便、快捷和高效的特点,CRISPR技术在生化学家中引起了广泛的关注。然而,相对于CRISPR在基因敲除、编辑以及调控中的应用,很少人将其应用于染色体位点标记来研究其机理与动力学过程。本文中,在细胞周期中应用了一个双色的CRISPR系统来标记并追踪两个染色体位点。该系统中,通过改造sgRNA和dCas9,让其被偶联上一些荧光蛋白(FPs)和标签蛋白(如HaloTag、SNAPTag),或者使用 MS2、PP7 等 RNA 适配子加上 MCP-GFP、PCP-HaloTag等外壳蛋白的组合。首先尝试了在固定细胞、活细胞中使用CRISPR/dCas9系统进行荧光标记的可行性与稳定性,并选则出适合实验的条件。后通过标记两个或者多个染色体位点,通过不同条件、时间下染色体位点之间距离变化情况、荧光位点运动情况以及标记位点所在位置,来研究细胞在不同状况下,染色体结构可能出现的展开、折叠、压缩等过程。并在不同尺度下研究染色体的结构,从而探索染色体形态结构与功能的关系。
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