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皮质鉴定问题是当前鞋服及制革质量检验行业亟待解决的技术问题。本课题采用傅里叶变换显微红外光谱法(micro-FTIR)对各类天然皮革、人造革材料进行显微图像及红外光谱分析。并在此基础上使用分子生物学技术,以典型皮革材料牛、猪、山羊皮革为例,对皮革中的DNA进行优化提取,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增并DNA序列测定的方法进行鉴定。
首先使用micro-FTIR对天然皮革、再生皮革和人造革等鞋服用革类材料进行分析,考察了样品的显微可见图像及各部位的红外光谱,结果发现天然皮革中的全粒面头层皮革、修饰面头层皮革、干法移膜剖层皮革、湿法移膜剖层皮革、绒面剖层皮革,再生革和人造革中的聚氨酯合成革、聚氯乙烯人造革具有明显差异的显微红外光谱特征,根据显微红外光谱特征谱图可以对以上材料进行分类鉴别,并总结出这几类革类材料的显微红外光谱特征。
其次利用分子生物技术,通过提取牛、猪、山羊皮革中残留的DNA,选择合适引物进行PCR反应,扩增出线粒体cytb基因中的目标DNA片段,通过序列测定进行动物种类判断。经过试验,由于影响PCR成功扩增的因素较多,导致存在较高的假阴性判断的风险,但通过典型皮革材料PCR扩增并测序,阳性判断的准确率高。而且选择合适引物,确定合适长度的扩增靶序列、纯化DNA模板、Nested-PCR技术均有利于提高PCR扩增成功的机会。本实验采用巢式通用引物对,扩增长度约220 bp的cytb基因片段,通过测序比对能够准确鉴定上述几种天然皮革材料。
基于研究结果,总结了傅里叶变换显微红外光谱法鉴定各类皮革的方法要点,验证了PCR扩增测序鉴定动物皮革种类的可行性,运用巢式PCR等措施提高了扩增成功率,并提出存在的问题和今后工作的方向,为最终解决皮质鉴定问题打下基础。