利用β-环糊精发酵废液生产糖化酶的研究

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在β-环糊精的生产过程中,淀粉浆利用率仅为40%左右,大部分的糖类进入到废液中,废液中总还原糖含量高达14.3%,直接排放会造成环境污染和资源的极大浪费。糖化酶的生产需要碳源含量高达30%,因此可以利用废液代替淀粉生产糖化酶,变废为宝。β-环糊精发酵废液的主要成分及含量为:还原糖为4.3%,酸解总糖为14.3%,酶解总糖为13.1%,可溶性固形物14.3%,焦糖色率约为650,环己烷的体积分数为0.15%。废液中基本不含有害物质,可以作为无孢子黑曲霉的原料。本试验所采用的黑曲霉HJ201不产孢子,更有利于生产糖化酶。该菌种的菌落、菌丝形态与普通的黑曲霉差距很大。菌落的特征为白色菌落,中部凹陷,四周凸起,菌落表面粗糙;菌丝特征为短而粗。废液对菌种特性的影响。观察在不同浓度的废液中,菌落形态和菌丝形态,以及产糖化酶活力的情况。结果表明:菌种在废液平板培养基上生长良好,形态正常;废液摇瓶中菌丝形态与对照中的菌丝基本无区别;不同浓度的废液摇瓶的酶活力均高于淀粉对照组,废液含量为84%的摇瓶,糖化酶活力最高,为8538U·mL-1,比对照结果高1438U·mL-1。利用废液发酵制备糖化酶的工艺研究。建立一系列的废液浓度梯度,在培养基中废液依次替代21%、42%、63%的淀粉,直至全部代替淀粉,并浓缩制得1.5倍、2倍浓度的废液培养基。实验结果表明,所有的废液培养产糖化酶活力均高于淀粉培养基对照组。全废液培养基产酶活力最高,经四级扩大培养后测定的酶活力高达9453U·mL-1。在工厂进行中试试验,二级种子罐发酵94.5h产糖化酶活力可达到11666U·mL-1,验证了试验室的结果,为工业化生产提供科学依据。利用废液生产糖化酶的培养条件优化。筛选出三个影响产酶的重要因素,用SAS软件进行响应面分析,结果表明,产糖化酶的最适培养条件为:温度34.7℃、pH4.8、摇瓶转速225rpm。环己烷对生产糖化酶的影响。在利用β-环糊精生产废液生产糖化酶的研究中,发现使用废液产酶活力高于淀粉,通过测定菌体-高纯水悬浮液的电导率以及在260nm和280nm处吸光度的变化情况,发现环己烷可以改变菌体细胞膜的通透性,从而有利于糖化酶的产生。当培养基中环己烷的体积分数为0.2%时,产糖化酶活力最高,比不含环己烷的对照组高出14.64%。
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