论文部分内容阅读
磺胺类药物是一类人工合成的具有氨苯磺胺结构的广谱抗菌类药物,由于其疗效确切、价廉易得,被广泛应用于动物原虫病和细菌性疾病的预防和治疗。该类药物在动物临床上长时间低剂量或治疗时高剂量等不合理使用,容易造成在动物性食品中的残留,从而对人类健康造成潜在的威胁。目前,磺胺类药物残留检测的主要方法是酶联免疫吸附试验(ELISA)和高效液相色谱法(HPLC)。但是这些检测方法操作烦琐,需要特殊仪器和专业人员操作,不适合于对大量样品的快速检测和筛选。胶体金免疫层析检测法(试纸条)是一种新型的快速检测方法,它具有易于保存,携带方便,操作简单、快速,分析结果易于判读,不需要专人操作和检测成本低等优点,非常适用于现场检测和对大量样品的筛选。本研究是在本实验室磺胺类药物单残留检测的基础上,通过筛选针对磺胺类药物特异性单克隆抗体和增加检测线条数建立了磺胺类药物多残留检测方法,并进行了初步应用研究,取得了如下结果。1.磺胺二甲基嘧啶(SM2)人工抗原的合成与单克隆抗体的制备利用重氮化法将磺胺二甲基嘧啶(SM2)与人血清白蛋白(HSA)和卵清白蛋白(OVA)相偶联,制成人工合成抗原HSA-SM2和OVA-SM2。通过可见光-紫外扫描对其进行鉴定,结果表明成功获得了上述偶联物。用HSA-SM2作为免疫原免疫BALB/c小鼠,用OVA-SM2作为包被原检测免疫效价与细胞培养上清,经细胞融合和五次克隆筛选得到8株抗SM2的特异性单克隆抗体株,其中以细胞株4D6和2G6所分泌抗的亲合力最强和效价最高,对上述2株单克隆抗体进行了详细的分析和鉴定。2.磺胺二甲基嘧啶(SM2)胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备与初步应用利用单克隆抗体4D6标记胶体金作为示踪物,利用人工合成抗原HSA-SM2 (1:6)作为检测线,利用兔抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线,制备SM2胶体金免疫层析快速检测试纸条,并对其灵敏度,特异性进行鉴定。该方法天内(Intra-day)变异系数在5.9%-8.4%之间；天间(Inter-day)变异系数在6.3%-9.3%之间,均小于15%。动物试验表明,本方法与高效液相色谱两种检测方法的阳性符合率为95.1%(21/22),阴性符合率为97.7%(42/43),总符合率为96.9%(62/64)。市场样品检测表明,两种检测方法的阳性符合率为90%(9/10),阴性符合率为99.7%(350/351),总符合率为99.4%(358/360)。3.磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺嘧啶(SD)与磺胺喹噁啉(SQX)残留三联检胶体金免疫层析快速检测纸条的制备及初步应用利用单克隆抗体3A9制备SM2, SD和SQX残留三联检胶体金免疫层析快速检测试纸条,并对其进行优化。该方法天内(Intra-day)变异系数在3.5%-7%之间;天间(Inter-day)变异系数在3%-8%之间,均小于15%。动物实验表明,本方法与高效液相色谱两种检测方法的阳性符合率为95.5%(21/22),阴性符合率为99.2%(122/123),总符合率为98.6%(142/144)。市场样品检测结果表明,两种检测方法的阳性符合率为93.3%(14/15),阴性符合率为99.8%(545/546),总符合率为99.6%(558/560)。4.磺胺类药物残留六联检胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备及初步应用在三联检试纸条的基础上,利用单克隆抗体2G6、SD4、SDL4、3A9制备磺胺类药物残留六联检胶体金免疫层析快速检测试纸条,并对其进行优化。该方法天内(Intra-day)变异系数在3.5%-9%之间；天间(Inter-day)变异系数在3%-10.2%之间,均小于15%。动物实验结果表明,本方法与高效液相色谱两种检测方法的阳性符合率为99.0%(95/96),阴性符合率为98.9%(89/90),总符合率为98.9%(182/184)。市场样品检测结果表明,本方法与高效液相色谱两种检测方法的阳性符合率为93.3%(14/15),阴性符合率为99.8%(545/546),总符合率为99.6%(558/560)。