论文部分内容阅读
1目的：1.1建立NK4因子原核基因工程表达体系。1.2建立NK4因子分离纯化工艺。1.3NK4因子抗肿瘤活性的研究测定。
2方法：我们通过原核基因工程表达体系制备出一种新型的抗肿瘤、抑制血管生成的蛋白质因子-NK4因子。采用体外实验法进行NK4蛋白因子的抗肿瘤活性测定，包括MTT法测定NK4因子对肿瘤细胞的选择性杀伤作用、NK4因子的不同浓度对肿瘤细胞侵袭重组基底膜的影响、对小鼠黑色素瘤细胞与基底膜成分粘附能力的影响、对肿瘤细胞趋化性运动能力的影响、对大鼠动脉无血清培养形成微血管样结构的影响。
3结果：3.1成功建立pGEX-4T-1-NK4/BL21表达体系。3.2GST-NK4融合蛋白得到纯化及复性。3.3NK4因子的的体外实验证实：NK4(10ug/m1)组对人乳腺癌细胞株MCF-7、B16-BL6小鼠黑色素瘤高转移株、A2780(人卵巢癌)、人结肠癌细胞有抑制作用(抑制率＞30％)，其中对B16-BL6小鼠黑色素瘤高转移株、A2780(人卵巢癌)、人结肠癌细胞的抑制率大于阳性对照组(顺铂)。
4结论：利用基因工程技术，成功建立pGEX-4T-1-NK4/BL21表达体系，并摸索了该表达体系的最佳实验室操作条件。再经过复性和GST亲和层析得到纯品NK4因子。癌的侵袭、转移行为是恶行肿瘤最本质的两大特征，如何防止及治疗侵袭及转移成为癌治疗研究的焦点之一。通过体外实验证实NK4(10ug/m1)组对人乳腺癌细胞株MCF-7、B16-BL6小鼠黑色素瘤高转移株、A2780(人卵巢癌)、人结肠癌细胞有抑制作用(抑制率＞30％)，其中对B16-BL6小鼠黑色素瘤高转移株、A2780(人卵巢癌)、人结肠癌细胞的抑制率大于阳性对照组(顺铂)。为其在治疗领域开发生物药品奠定初步实验和理论基础。