论文部分内容阅读
目的1.建立氪激光引导的BN大鼠CNV(choroidal neovascularization,脉络膜新生血管)模型,观察4W时间内CNV的生长情况。2.用RT-PCR方法检测VEGF(vascular endothelial growth factor,血管内皮生长因子)在试验过程中的表达情况。检测FⅧ-RAg(FactorFⅧ-Related Antigen,Ⅷ因子相关抗原)表达来对新生血管进行半定量研究,观察CNV的生长情况,研究VEGF与CNV生长的关系,从而探讨在CNV生长中的作用。3.光凝后一周,FFA检查显示有CNV形成,玻璃体腔内注射Bevacizumab(Avastin),观察3W时间内CNV的生长情况,从而对Bevacizumab(Avastin)治疗试验性CNV的疗效做一初步的探讨。方法1.对5组40只BN大鼠应用氪激光(波长647nm)实验眼视网膜进行光凝,功率360mW、光斑直径50um、曝光时间0.05s,围绕视盘等距光凝8个点,创建CNV模型。2.于光凝后3d,14d,21d,28d行FFA检查,造影早期计算CNV面积。在上述时间各处死动物8只,摘除眼球。光镜下对HE染色切片进行CNV形态学改变的评价。应用免疫组化方法,检测FⅧ-RAg表达来对新生血管进行半定量研究,观察CNV的生长情况。观察各组大鼠光凝区和正常视网膜中VEGF的表达,并用RT-PCR方法对VEGFmRNA的表达做半定量分析。分析VEGF在CNV形成中的作用。3.对48只BN大鼠单眼进行氪激光光凝,建立CNV模型,随机分为治疗组及对照组。一周后,经FFA证实有CNV形成,药物治疗组玻璃体腔内注射1μl Avastin(25μg/1μl),对照组则在光凝眼行玻璃体腔内注射BSS1μl。注射后1W、2W、3W行FFA检查,造影早期计算CNV面积。在上述各时间各处死动物6只,摘除眼球,制作石蜡切片。免疫组化对FⅧ-Rag蛋白的表达进行半定量检测。4.实验数据以均值±标准差表示,行方差分析和t检验等统计学处理。结果1. FFA光凝斑盘状荧光素渗漏,证实CNV形成。在4W时间里,FFA造影结果和FⅧ-RAg免疫组化结果显示,CNV呈持续增长(P<0.05),21d达到高峰。2.在CNV形成的4W时间里,FⅧ-Rag蛋白表达增加(P<0.05)。VEGFmRNA的表达也显著增加。VEGF的蛋白质在正常BN大鼠视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜和脉络膜血管内皮细胞表达。试验眼光凝后,在激光损伤区,VEGF的蛋白质表达于视网膜神经节细胞层、内核层、外核层缺损区、色素上皮层、视网膜和脉络膜血管内皮细胞、CNV增殖区。3.在BN大鼠CNV动物模型采用玻璃体腔内注射1μl Avastin(25μg/1μl)后,在1W、2W、3W时间里,与对照组相比,CNV面积及荧光渗漏明显降低(P<0.05),FⅧ-Rag蛋白表达较对照组降低(P<0.05),证实CNV的形成较对照组明显降低。结论1.氪激光诱导BN大鼠产生CNV模型,病理结构稳定。2. VEGF诱导内皮细胞分化,在CNV的形成过程中起着主要作用。3.玻璃体腔内注射Bevacizumab(Avastin)可以抑制氪激光诱导的BN大鼠CNV的形成和发展