具有拮抗空肠弯曲杆菌效应的乳酸菌的研究

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空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)作为人畜共患病原菌,是感染性腹泻的主要病原菌之一。目前用于临床治疗C. jejuni感染的常用药物为抗生素,长期使用会带来药物的体内残留并诱发耐药性,已有研究报道采用益生菌做为防治C. jejuni感染的手段。因此,本文旨在于筛选具有拮抗空肠弯曲杆菌效应的乳酸菌,通过考察其对人工模拟胃肠液的耐受情况,测定乳酸菌与空肠弯曲杆菌共培养生长的情况,分析上清液中的抑菌成分,评价C. jejuni在粘附、侵袭人体结肠癌细胞HT-29时乳酸菌的抑制作用,并且进一步构建空肠弯曲杆菌感染小鼠的模型。以本课题组之前测定乳酸菌原始发酵上清液对空肠弯曲杆菌的体外生长抑制作用这一实验所初步筛选出来的15株乳酸菌为基础,讨论了其在人工模拟胃液以及肠液中的耐受能力,发现无论是在人工胃液或是肠液的培育中,15株乳酸菌的耐受能力均良好,为其在肠道中定植并拮抗C. jejuni的生长提供了前提条件。测定了15株乳酸菌与空肠弯曲杆菌共培养下的生长情况,结果显示共培养48h后,大部分实验组C. jejuni活菌数下降了约1.0log CFU/mL,然而L. salivarius ZX5组中的C. jejuni活菌数下降了约2.0log CFU/mL,其抑菌效果远远大于其他实验菌株,初步筛选出拮抗C. jejuni效果更优的L. salivarius ZX5。初步分析了15株乳酸菌的抑菌物质,发现其均受pH影响,且耐热情况良好,而L. salivarius ZX5中的抑菌物质还受到H2O2酶以及各种蛋白酶的影响,由此可推断L.salivarius ZX5代谢产物中含有有机酸及细菌素类物质并能有效抑制C. jejuni的生长。采用HT-29细胞模型分析了L. salivarius ZX5等对C. jejuni粘附和侵袭宿主细胞是否具有抑制作用,结果表明,L. salivarius ZX5能有效抑制C. jejuni对HT-29细胞的粘附与侵袭,进一步证明L. salivarius ZX5拮抗C. jejuni生长的潜在能力。进行了空肠弯曲杆菌感染小鼠模型的构建,通过结合临床评分、考察小鼠肠道内C. jejuni活菌数以及对各细胞因子检测的方法,建立了一套对小鼠预先感染侵袭性大肠杆菌ATCC4389,之后灌胃C. jejuni的感染模型,该模型中C. jejuni能在小鼠肠道中进行有效定植,为今后乳酸菌拮抗空肠弯曲杆菌的动物体内实验研究提供良好的感染模型基础。通过以上研究,筛选出一株具有优良拮抗C. jejuni效应的L. salivarius ZX5,并可进一步研究其在体外或体内拮抗C. jejuni的感染。
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