论文部分内容阅读
樟子松中含有多糖、黄酮、多酚类物质、有机酸、鞣质等丰富的有效成分,具有药用开发价值。樟子松树皮多酚的提取、分离纯化及结构纽分分析旨在通过樟子松多酚的提取工艺、纯化工艺、成分结构和多酚-蛋白复合反应进行较为系统的研究,为多酚的相关研究奠定基础,为樟子松的综合利用和深度开发提供依据。具体的研究内容如下：1、樟子松树皮松多酚提取工艺研究。比较有机溶剂提取法、超声波辅助提取法和超声波-复合酶法对樟子松树皮松多酚提取效果的影响。实验结果表明,有机溶剂提取樟子松树皮中多酚的适宜工艺条件为：乙醇浓度为60%,料液比为1:25(g/mL),提取时间为4h,提取温度为60℃。超声波辅助提取樟子松树皮中多酚适宜工艺条件为：超声功率为300W,超声时间为2.5h,超声温度为60℃,溶液pH为3.0。超声波-复合酶法提取樟子松树皮中多酚适宜提取工艺条件为：酶解时间为40mmin,酶解温度为45℃,加酶量为4%,酶解pH为4.0。三种提取方法在最适宜条件下的松多酚得率分别为12.56、23.01、30.12mg/g。超声波-复合酶辅助提取法提取时间最短、提取效率最高,提取效果最好,超声波辅助提取法次之,二者提取效果均好于有机溶剂提取法。2、樟子松多酚的纯化研究。以吸附率和解析率为衡量指标,确定纯化樟子松树皮多酚的最佳树脂；以多酚纯度和回收率为衡量指标,研究纯化过程中影响较大的因素,并且利用响应面优化樟子松树皮多酚的纯化工艺。实验结果表明：选取9种大孔吸附树脂并分别对其进行静态吸附和解吸实验及动态实验,最终确定出选取AB-8大孔树脂进行松多酚的纯化工艺研究。通过爬坡实验和响应面设计实验优化出松多酚初级纯化的最佳条件为洗脱剂乙醇浓度51.6%、上样液浓度2.5mg/mL、上样液体积28mL、洗脱速率10mL/min、径高比1：27.3。利用Sephadex LH-20层析柱对经AB-8大孔吸附树脂纯化所得的松多酚进行分离纯化,得到二次纯化的松多酚,纯度为85%。3、樟子松多酚结构分析的研究。采用HPLC、UV-VIS、IR和LC-MS对多酚化合物成分和结构进行分析鉴定。实验结果表明：通过紫外吸收光谱分析松多酚在240-280nm、300-400nm这两个波长范围内均有吸收峰,可以初步鉴定松多酚中含有黄酮类物质。傅里叶变换红外光谱可以得到松多酚的酚羟基Ar-OH在3400cm-1v O-H对称伸缩振动产生强而宽的特征吸收峰以及在1390-1315cm-1的羟基δ O-H面内弯曲振动吸收峰,说明松多酚分子中存在酚羟基,属于酚类物质。液质联用分析可以推断52.317min时该物质可能为芥子酸-葡糖糖苷,63.344min时可能为芍药-3-葡萄糖(半乳糖)苷或者矢车菊-3-(6-O-乙酰基)-葡糖糖(半乳糖)苷,69.963min寸可能为芥子酸芍药色素-3-槐糖苷。4、樟子松多酚-蛋白复合反应的研究。选取了明胶、牛血清蛋白、大豆分离蛋白三种蛋白质分别与多酚进行反应,研究不同反应条件对多酚-蛋白质相互作用的影响。实验结果表明,多酚-明胶复合反应的适宜条件为：多酚：明胶=2：1；温度为40℃；反应时间为30min；pH值为7；多酚-牛血清蛋白复合反应的适宜条件为：多酚：牛血清蛋白=2：1；温度为30℃；反应时间为40min；pH值为5；多酚-大豆分离蛋白复合反应的适宜条件为：多酚：大豆分离蛋白=1：4；温度为30℃；反应时间为20min；pH值为5。