【摘 要】
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香花槐(Robinia ambigua L. Idahoensis),是观赏、水保、饲料和蜜源兼优的多用途树种.毛白杨(Populus tomentosa Carr.)是中国北方速生的用材和绿化乡土树种.转基因提高其非
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香花槐(Robinia ambigua L. Idahoensis),是观赏、水保、饲料和蜜源兼优的多用途树种.毛白杨(Populus tomentosa Carr.)是中国北方速生的用材和绿化乡土树种.转基因提高其非生物胁迫耐性,将为干旱或盐碱问题的土壤利用、植被恢复提供急需的林木种质资源.mtl-D基因编码1-磷酸甘露酶脱氢酶(mtlD),催化细胞质中6-磷酸果糖生成1-磷酸甘露醇,其后非特异性的磷酸脂酶催化1-磷酸甘露醇生成甘露醇作为一种渗透调节物质.mtl-D基因的过量表达将使细胞质中甘露醇增加,从而降低细胞水势提高保水能力增强非生物胁迫耐性.在建立林木受体系统基础上,将植物双元表达载体pBin438的T-DNA区段(NPT-Ⅱ-35S-35S-Ω-mtl-D),以农杆菌AGL1介导叶盘法分别导入香花槐和毛白杨叶片,在附加抗生素的培养基上诱导获得不定芽及其生根植株,分别经过PCR和Southern blotting分析、生理耐逆性试验,mtl-D表达产物分析等获得mtl-D基因已经整合并正确表达的转基因植株.其结果如下:1.建立了香花槐转基因再生植株体系,叶片外植体在培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+G41 8 8mg/L上诱导产生不定芽,不定芽在培养基1/2MS+IBA 0.25mg/L上诱导生根.2.确定了香花槐叶片不定芽诱导G418临界敏感浓度为8mg/L;毛白杨叶片不定芽诱导卡那霉素临界敏感浓度为30mg/L.3.农杆菌介导叶盘法转耐逆基因mt1D转化香花槐、毛白杨,获得了G418抗性香花槐5株和卡那霉素抗性毛白杨6株.香花槐抗G418的5个株系,PCR检测均为阳性,NPTⅡ基因Southern blotting显示4个株系有杂交信号;毛白杨抗Kan的6个株系,PCR检测和NPT Ⅱ基因Southern blotting显示5个株系为阳性.4.转基因香花槐甘露醇含量是野生型的3-29倍,耐旱性试验中一个株系较耐旱;转基因毛白杨甘露醇含量为对照的1.5-4倍,两个株系在附加NaCl 0.8%的培养基上能生长.结论是外源的mtl-D基因已经整合到香花槐4个株系、毛白杨5个株系的基因组DNA中表达.
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