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目的:
1.观察膀胱肿瘤T24细胞在EPI作用下自噬相关基因Beclin-1和LC3(Ⅰ、Ⅱ)表达情况，以及自噬相关通路mTOR中pAKT、AKT、p70s6k蛋白表达，并讨论EPI作用后肿瘤细胞自噬的可能机制。
2.调节膀胱肿瘤T24细胞自噬表达水平，观察缅胞对于EPI治疗敏感性的变化以及自噬相关基因Beclin-1和LC3 mRNA和蛋白表达情况，并讨论自噬在膀胱肿瘤化疗中的作用。
方法:
1.不同浓度化疗药物EPI作用于膀胱肿瘤T24细胞24h，MTT检测药物对膀胱肿瘤细胞增殖抑制率的影响，Western blot检测Beclin-1、LC3(Ⅰ、Ⅱ)、pAKT、AKT、p70s6k等蛋白表达，RT-PCR检测LC3、Beclin-1的mRNA转录情况水平。免疫荧光检测LC3(Ⅰ、Ⅱ)蛋白表达。
2.用MTT筛选出EPI处理浓度，EPI浓度为1mg·L-1，3-MA浓度为10mmol·L-1。将实验分为正常对照组、EPI组、EPI联合自噬抑制剂3-MA组，及单用3-MA组，药物处理膀胱肿瘤T24细胞24h后，MTT和流式细胞术分别检测药物对细胞增殖抑制率和细胞凋亡率的影响，免疫荧光检测LC3(Ⅰ、Ⅱ)表达，RT-PCR及Western blot检测Beclin-1和LC3 mRNA和蛋白的表达。
结果:
1.不同浓度EPI作用于T24细胞24 h后，可明显抑制细胞增殖，并呈浓度依赖性。Western blot检测显示，膀胱肿瘤细胞经EPI处理后，自噬相关基因LC3(Ⅰ、Ⅱ)、Beclin-1表达增强，随EPI药物浓度的增加而表达增加。免疫荧光和RT-PCR检测自噬相关基因LC3(Ⅰ、Ⅱ)、Beclin-1表达结果与Western blot检测结果相似。而Western blot检测显示，自噬上游mTOR通路中pAKT、p70s6k蛋白表达均有明显下降，且随着EPI药物浓度的增加而表达下降，AKT表达无明显变化。
2.EPI可以促进自噬相关基因LC3(Ⅰ、Ⅱ)及Beclin-1表达;3-MA单独使用时抑制了T24细胞自噬相关基因LC3(Ⅰ、Ⅱ)及Beclin-1的表达，对T24细胞增殖有明显抑制，但细胞凋亡率同正常对照组比较，差异无统计学意义。EPI联合自噬抑制剂3-MA作用后，自噬相关基因LC3(Ⅰ、Ⅱ)及Beclin-1表达较EPI组有明显下降，而细胞增殖抑制率从（36.99±0.69）％增加到(57.65±2.97)％，细胞凋亡率从(22.35±1.03)％增加到(36.94±1.63)％，差异均具有统计学意义。
结论:
1.EPI能诱导膀胱肿瘤T24细胞发生细胞自噬，而自噬的发生可能是通过抑制mTOR通路从而促进其发生。
2.EPI引发的自噬抑制了其对膀胱肿瘤T24的凋亡作用，而抑制细胞自噬则起到了化疗协同作用。