靶向神经胶质瘤重组抗体的构建及其体内、外抑瘤实验研究

• 作 者: 马程远
• 出 处: 吉林大学
• 发表日期: 2013年期
• 关键词: EGFR LuffinP1 单链抗体 免疫治疗制剂 神经胶质瘤

异常的表皮生长因子受体（EGFR）表达是包括胶质母细胞瘤（GBM）在内的多种肿瘤的共同特征。因此，EGFR逐渐成为肿瘤治疗的重要靶标。本研究的目的在于制备一种能够靶向EGFR阳性肿瘤细胞，并具有肿瘤细胞抑制功能的抗肿瘤免疫导向重组蛋白。核糖体失活因子LP1具有分子量小（5kDa）和蛋白合成抑制功能，因此本研究选择其作为重组蛋白antiEGFR/LP1的核心元件。本研究将LP1通过柔性连接肽连接至抗EGFR单链抗体序列C末端，通过大肠杆菌原核表达系统对其进行了表达，并利用Ni2+柱对表达获得的重组蛋白进行了复性和纯化。SDS-PAGE和westernblotting分析结果表明，重组蛋白antiEGFR/LP1得到了有效表达；荧光共聚焦和流式细胞术分析结果显示，重组蛋白能够与EGFR阳性细胞U251有效结合且主要集中于细胞膜表面，而在相同作用时间和作用剂量条件下与EGFR阴性细胞Jurkat无结合活性。本研究还通过MTT染色分析了antiEGFR/LP1对U251细胞和Jurkat细胞的抑制作用。实验结果表明，antiEGFR/LP1能够有效抑制EGFR阳性细胞U251的增殖，且作用时间和作用剂量均与其对U251细胞的抑制作用有关，而antiEGFR/LP1对EGFR阴性细胞Jurkat无明显影响。另外，本研究还制备了BALB/c裸鼠荷U251实体肿瘤模型，并在此基础上探讨了antiEGFR/LP1对体内实体肿瘤的抑制作用。实验结果表明，antiEGFR/LP1能够减缓模型动物体内U251实体肿瘤的生长，提高模型动物平均生存期，延长模型动物肿瘤倍增时间和肿瘤延迟时间。以上结果均表明，本研究所制备的靶向EGFR的重组抗体antiEGFR/LP1可用于神经胶质瘤的防治研究。