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[目的]
1.利用绿色荧光蛋白标记的大肠杆菌进行体外抑菌试验，通过测定荧光强度和荧光拍照，比较几种抗菌药的抑菌效果。
2.采用绿色荧光蛋白标记的大肠杆菌构建细菌性前列腺炎模型，观察细菌在组织中的侵袭路径和机体免疫系统中的吞噬细胞对细菌侵袭的作用。
3.建立致病菌和抗菌药的可视化分析方法，探索更精确的抗菌药治疗细菌性前列腺炎在体药动学-药效学(PK/PD)混合动力学模型的研究方法。
[方法]
1.荧光标记的大肠杆菌体外抗生素抑菌试验的研究1.1.GFP基因PCR检测按照文献记录的条件对K88：gfp/lux进行PCR检测。
1.2.抗生素的体外抑菌试验利用含有绿色荧光蛋白(GFP)基因致病菌进行几种药物的体外抑菌试验，根据NCCLS推荐的试管二倍稀释法、微量稀释法和琼脂稀释法进行抗菌药的体外抑菌试验，通过荧光强度测定和荧光拍照对三种方法的结果进行比较。
2.用GFP标记的大肠杆菌K88建立大鼠细菌性前列腺炎动物模型和抗菌药体内抑菌试验的研究2.1.大肠杆菌所致大鼠细菌性前列腺炎模型的制备用含有绿色荧光蛋白(GFP)基因致病菌建立细菌性前列腺炎模型；根据病理切片，荧光、普通光对比照片以及组织荧光强度测定，推测细菌侵袭路径和机体免疫系统的反应。
2.2.抗生素体内抑菌试验的研究按2.1中方法建立细菌性前列腺炎模型，前列腺炎模型鼠腹腔注射不同剂量的盐酸左氧氟沙星，每12小时给药一次，给药3天，第四天给药1h后心脏取血和前列腺组织，组织处理后荧光拍照已经测荧光强度，同时采用高效液相色谱法测定测定药物在血液和组织中的浓度，通过荧光强度比和血药浓度的关系进行致病菌和抗菌药的原位定量化分析。
[结果]
1.荧光标记的大肠杆菌体外抗菌药抑菌试验的研究1.1.GFP基因PCR检测按照文献记录的条件对K88：gfp/lux进行PCR检测，得出K88：gfp/lux菌株含有gfp基因。
1.2.抗生素的体外抑菌试验阿奇霉素、庆大霉素、环丙沙星、盐酸左氧氟沙星对K88：gfp/lux的MIC分别为16μg/mL、1μg/mL、1μg/mL、1μg/mL，MBC分为32μg/mL、1μg/mL、1μg/mL、1μg/mL。
2.用GFP标记的大肠杆菌K88建立大鼠细菌性前列腺炎动物模型和抗菌药体内抑菌试验的研究2.1.大肠杆菌所致大鼠细菌性前列腺炎模型的制备通过表面拍照和切片可以看出在造模1d大鼠前列腺左右两侧叶已发生病理变化，细菌已经侵袭腺腔且在其中大量繁殖；造模2d时，在荧光图中可以看出吞噬细胞由于吞噬携带绿色荧光的大肠杆菌而使得自身有荧光；造模3d腺体含大量炎症细胞，炎症细胞开始进入腺腔内，吞噬细胞的进入使得腺腔内有大量晶簇状荧光产生；造模4d腺体结构变形，内可见脱落坏死的腺细胞，增生的纤维细胞向腺体内延伸，增生较严重；造模5d，大量炎症细胞增生渗出，腺腔上皮细胞明显压扁，少数被破坏，腺腔形成脓肿；造模6d，腺体原有结构已被破坏，腺体细胞变质，上皮细胞被破坏，仅剩腺腔的轮廓。腺腔内和间质弥漫着大量炎症细胞。
2.2.抗菌药体内抑菌试验的研究2.2.1.血液和组织中盐酸左氧氟沙星分析方法学考察模型大鼠血液中，低、中、高浓度组的方法平均回收率分别为80.5％、83.2％、89.7％；日内精密度分别为7.56％、6.47％、4.73％；日间精密度分别为8.90％、6.63％、5.81％。模型大鼠组织匀浆液中，低、中、高浓度组的方法平均回收率分别为85.41％、89.0％、87.3％；日内精密度分别为5.98％、6.36％、4.32％；日间精密度分别为7.15％、7.32％、3.77％。说明该方法灵敏，重现性好。
2.2.2.PK/PD模型建立利用模型组荧光强度与治疗组荧光强度差值与模型组荧光强度比，得出的结果与组织中药物浓度做图，初步得出在体PD/PK模型。
[结论]
1.本研究首次利用绿色荧光蛋白标记的细菌进行药物体外抑菌试验，得出几种抗菌药体外不同浓度的抑菌情况，同时得出细菌在不同浓度的抗菌药的抑菌作用下的生长曲线，该方法不仅可以更简便、快速的得出MIC和MBC，而且可以更准确、详细的发现药物对细菌以及细菌对药物二者之前的影响，对研究新药的药理作用机制有较大帮助。
2.本研究首次利用绿色荧光蛋白标记的细菌构建细菌性前列腺炎模型，利用表面拍照和病理切片相对比得出细菌在前列腺组织中的侵袭路径以及机体免疫系统中的吞噬细胞对细菌侵袭的作用。
3.本研究利用测定治疗后组织的荧光强度与组织中药物浓度的关系，得出初步的在体PK/PD模型，为下一步研究奠定基础。