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1.1目的本实验通过妊娠SD大鼠慢性吸入福州城区大气PM2.5制作PM2.5动物暴露模型,并多层面观察PM2.5对OVA诱导的新生鼠支气管哮喘影响,进一步研究PM2.5对仔鼠呼吸系统发育及功能影响、潜在作用机制。1.2方法清洁级妊娠SD孕鼠随机分为8组,每组6只:过滤空气产前暴露-生理盐水组(FA产前-NS),过滤空气产前暴露-卵清蛋白组(FA产前-OVA),过滤空气产后暴露-生理盐水组(FA产后-NS),过滤空气产后暴露-卵清蛋白组(FA产后-OVA),大气细颗粒物产前暴露-生理盐水组(PM2.5产前-NS),大气细颗粒物产前暴露-卵清蛋白组(PM2.5产前-OVA),大气细颗粒物产后暴露-生理盐水组(PM2.5产后-NS),大气细颗粒物产后暴露-卵清蛋白组(PM2.5产后-OVA)。产后暴露组先放在动物实验室喂养,产前暴露组放在PM2.5暴露实验室进行暴露。仔鼠出生第1d,PM2.5产前暴露组暴露时间结束,PM2.5产后暴露组放在暴露箱内开始暴露直至哺乳期结束(产后21天)。将0.5μg卵清蛋白(OVA,Sigma)溶于200μg氢氧化铝凝胶配制成20μL混合液,OVA组致敏在幼鼠出生第9和15天分别腹腔注射20μL OVA,妊娠同期生理盐水组注射生理盐水20μL。产后第24,25,26天幼鼠雾化吸入1%OVA生理盐水溶液30分钟激发支气管,以建立动物哮喘模型。对照组用生理盐水替代。心内穿刺取血,Elisa法检测仔鼠血浆中IL-4、IL-5、IFN-γ、8-IP的含量。Western blotting法检测肺组织GATA-3、T-bet转录因子蛋白表达量变化。Real-time PCR法检测脾组织micro RNA-146a、micro RNA-146b的表达情况。1.3结果1.3.1光镜下观察幼鼠肺组织显示:FA-OVA组和PM2.5-OVA组可见肺泡腔明显狭窄甚至消失,肺间质炎症细胞浸润加重,肺泡间隔淤血,PM2.5-OVA组更为严重。FA-NS组和PM2.5-NS组未见明显异常。1.3.2产前单纯PM2.5暴露或OVA注射均能升高幼鼠血浆IL-4、IL-5水平(P<0.05),产前单纯PM2.5暴露能降低幼鼠血浆IFN-γ水平(P<0.05)。无论是单纯PM2.5产前暴露或OVA注射还是联合作用都表现出幼鼠基因GATA-3表达升高和T-bet表达下降。1.3.3产前单纯PM2.5暴露或OVA注射均能升高幼鼠脾组织Micro RNA-146a、Micro RNA-146b表达水平(P<0.05)。PM2.5暴露和OVA注射对幼鼠脾组织Micro RNA-146a表达的影响有交互作用(P<0.05),对Micro RNA-146b无交互作用(P>0.05)。以上各结果在PM2.5产后暴露组不如产前暴露组明显。1.4结论1.4.1福州市城区空气PM2.5产前暴露对幼鼠肺组织可产生一定炎症反应,在OVA对新生鼠诱导哮喘的基础上有一定叠加作用,说明妊娠期PM2.5暴露对幼鼠哮喘易感性增加有影响。1.4.2 PM2.5产前暴露组幼鼠转录因子GATA-3表达升高和T-bet表达下降,血浆相应出现Th2型细胞因子IL-4、IL-5高表达,Th1型细胞因子IFN-γ表达抑制,提示免疫-炎症反应可能是PM2.5暴露对幼鼠哮喘影响的作用机制之一。脾组织Micro RNA-146a、Micro RNA-146b表达水平升高说明表观遗传学可能也参与了对幼鼠哮喘的影响。