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背景:慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是肾脏病科常见的一种疾病,患者的发病率在不断的升高,并且CKD终末阶段的患者的数量也在不断的增多。目前,透析和肾移植仍是治疗终末期肾脏病的主要方式,肾脏病到最后终末期,肾移植是最为有效的治疗方式,但依然存在肾源严重短缺的问题,干细胞移植是一种理想的治疗方式。近年来,干细胞其最主要的特点是具有多向的分化能力,干细胞应用于组织修复和再生的治疗方法,已成为医学研究的焦点。胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)能够分化成多种细胞类型,因此,胚胎干细胞可以被看做是用于肾再生疗法的有效工具。我们利用生物微胶(Gelatin Microcryogels,GMs)载体,承载胚胎干细胞,同时借助腹腔大网膜的包裹作用,研究胚胎干细胞对大鼠5/6肾切除肾脏的保护作用,为ESCs在肾脏病方面的治疗提供一定的实验依据。 目的:构建生物微胶—胚胎干细胞复合物,检测两者的生物相容性;构建大鼠5/6肾切除慢性肾衰模型;利用大网膜将生物微胶—胚胎干细胞复合物包裹在5/6肾切除大鼠的残肾表面来检测对大鼠CKD模型的肾脏保护作用。 方法:(1)构建生物微胶-胚胎干细胞复合物,生物微胶与胚胎干细胞体外共培养96h后,行冰冻组织HE染色,观察细胞贴附及生存状况;将生物微胶与胚胎干细胞共培养,通过CCK8测试来检测细胞增殖能力;同时在光镜和双光子显微镜下观察两者的兼容性。(2)40只SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组),5/6肾切除组(NPX组),5/6肾切除加大网膜包绕残肾组(NPX+OM组),5/6肾切除加大网膜包裹胚胎干细胞包绕残肾组(NPX+OM+ESCs组),5/6肾切除加大网膜包裹胚胎干细胞微胶复合物包绕残肾组(NPX+OM+GMs+ESCs组),每组8只。12周采集血样本和尿样,测定各组大鼠血清肌酐和24h尿蛋白定量情况,处死大鼠后留取大鼠肾组织标本,进行PAS和MASSON染色来评估肾脏病理及肾小管评分情况。同时行α-SMA,TGF-β,COL-Ⅲ免疫组化染色和Western blot分析来评估肾脏损伤及修复情况。 结果:(1)生物微胶-胚胎干细胞复合物HE染色显示胚胎干细胞能在生物微胶上良好的贴附及生长;双光子激光共聚焦显微镜的检测证实胚胎干细胞能在生物微胶上良好的生长;CCK8检测说明生物微胶对胚胎干细胞增殖生长能力无影响。(2)在第12周处死大鼠后,通过血生化检测发现大网膜包裹胚胎干细胞生物微胶复合物包绕残肾组能有效降低血浆肌酐水平;肾脏病理切片机免疫组化结果显示能够减少肾小球硬化和肾小管间质损伤。 结论:生物微胶-胚胎干细胞有良好生物兼容性。在建立的大鼠5/6肾切除模型中,证明了大网膜包裹胚胎干细胞微胶复合物包绕残肾组相对于单纯5/6肾切除组能有效降低慢性肾脏病的进展和减少肾脏损伤,拮抗5/6肾切除大鼠的肾脏纤维化程度并显示出良好的治疗作用。