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目的原发性肝细胞肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,肝癌在全球死亡率居高不下,肝癌的早期诊断对病人的生存至关重要,绝大部分早期肝癌可以通过手术进行治愈性治疗,因此发现一种新的早期诊断肝癌的标志物尤其迫切。exosome与miRNA在诊断肝癌方面已经被越来越多的人关注,Exosome是由多种细胞可分泌的直径为纳米量级的膜性小囊泡结构。其中含有肿瘤特定的蛋白质与核酸,而这些物质使得exosome具有一些生物学特性。又因为exosome具有双侧膜结构,可以很好的保护内含物,而exosome又具有富集作用。据此,我们可以把exosome作为诊断肿瘤的标志物。本研究根据前期实验室对于exosome与血浆miRNA芯片分析为基础,利用相对定量PCR方法,以exosome独特的生物学功能方面,结合其中含有的miRNA可作为诊断肝癌的标志物进行验证,并与血浆中miRNA在作为标志物的敏感性与特异性上进行比较。最终探讨以exosomal miRNA组合作为肝癌诊断标志物的可能性。方法本实验的血浆标本均收集本医院、本科室随机收集的未经任何标准治疗肝癌病人血浆(乙肝-肝硬化-肝癌),共50例。所有标本均经病例检查证实。对照组采用同医院与实验组同一时期随机收集的肝硬化病人血浆50例,以及正常健康人血浆20例。应用Affymetrix以做miRNA的芯片分析；利用tapman探针法的相对定量PCR以检测：niRNA在血浆中与exosome中得表达含量。统计学分析：采用prism软件作图并进行ROC曲线分析,测出各个miRNA的敏感性与特异性；采用SPSS13.0统计软件进行数据分析,并计算miRNA panel的敏感性与特异性,P<0.05有统计学意义。结果1.3例肝癌病人、3例肝硬化病人以及3例正常健康人血浆和exosome溶液进行niRNA芯片分析结果显示Exosome组中测得204个表达差异有意义的miRNA,远高于血浆组的92个,我们通过芯片结果还发现exosome组与血浆组相包含的miRNA有43个2.在36例肝癌与38例对照组(18例肝硬化,20例正常人)miRNA26a比较：(1)肝癌组与肝硬化组exosomal miRNA26a相比较,敏感性为82%,特异性为100%,二者比较差异非常显著(P<0.01),而肝癌与肝硬化外周血比较,miRNA26a敏感性为68%,特异性为100%,二者比较差异非常显著(P<0.01)(2)肝癌组与正常组exosomal miRNA26a相比较,敏感性为100%,特异性为100%,二者比较差异非常显著(P<0.01),而肝癌与健康人外周血比较,miRNA199a敏感性为50%,特异性为95%,二者比较差异非常显著(P<0.01)(3)肝硬化与正常组exosomal miRNA26a相比较,敏感性为90%,特异性为89%,二者比较差异非常显著(P<0.01),而肝硬化与健康人外周血比较,miRNA26a敏感性为88%,特异性为50%,二者无统计学差异(P=0.51)。3.在20例肝癌与31例对照组(11例肝硬化,20例正常人)miRNA199a比较：(1)肝癌组与肝硬化组exosomal miRNA199a目比较,敏感性为59%,特异性为89%,二者比较差异显著(P<0.05),而肝癌与肝硬化外周血比较,miRNA199a敏感性为67%,特异性为83%,二者比较差异非常显著(P<0.01)(2)肝癌组与正常组exosomal miRNA 199a相比较,敏感性为1000%,特异性为100%,二者比较差异非常显著(P<0.01),而肝癌与健康人外周血比较,miRNA199a敏感性为67%,特异性为89%,二者比较差异非常显著(P<0.01)(3)正常组与肝硬化组exosomal miRNA199a相比较,敏感性为100%,特异性为100%,二者比较差异非常显著(P<0.01),而肝硬化与健康人外周血比较,miRNA26a敏感性为67%,特异性为61%,二者无统计学差异(P=0.25)4.在20例肝癌与40例对照组(20例肝硬化,20例正常人)miRNA29c比较：(1)肝癌与肝硬化组exosomal miRNA29c相比较,敏感性为79%,特异性为86%,二者比较差异非常显著(P<0.01),而肝癌与肝硬化外周血比较,miRNA29c敏感性为83%,特异性为45%,二者比较差异不显著(P=0.59)(2)肝癌组与正常组exosomal miRNA29c相比较,敏感性为1000%,特异性为100%,二者比较差异非常显著(P<0.01),而肝癌与健康人外周血比较,miRNA199a敏感性为50%,特异性为90%,二者比较差异非常显著(P<0.01)(3)正常组与肝硬化组exosomal miRNA29c相比较,敏感性为100%,特异性为100%,二者比较差异非常显著(P<0.01),而肝硬化与健康人外周血比较,miRNA29c敏感性为55%,特异性为95%,二者比较差异非常显著(P<0.01)5.在20例肝癌与30例对照组外周exosome中,我们利用spss软件对miRNA26a、miRNA29c和miRNA199a进行多元逻辑回归分析,测出niRNA panel敏感性为94%,特异性为90%,二者比较差异非常显著(P<0.01)6.我们对20例肝癌与10例正常组exosome中miRNA122做相对定量PCR,测出敏感性89%,特异性100%,二者比较差异非常显著(P<0.01),而血浆组敏感性为83%,特异性为100%,二者比较差异非常显著(P<0.01)结论1.肝硬化和健康人的miRNA-26a、miRNA-29c和miRNA-199a表达水平均高于肝癌组2.在诊断肝癌和肝硬化上,Exosome中的niRNA-26a比血浆拥有更高的敏感性和特异性；3.在诊断肝癌和肝硬化上,Exosome中的niRNA-29c比血浆拥有更高的敏感性和特异性；4.在诊断肝癌,Exosome中miRNA-199a比血浆拥有更高的敏感性,而在诊断肝硬化上,exosome中的miRNA-199比血浆拥有更高的敏感性和特异性；5. Exosome miRNA panel比单独miRNA-26a、miRNA-29c和miRNA-199a诊断肝癌具有更高的敏感性和特异性；6.肝癌组miRNA-122表达水平高于正常人群组；7. miRNA-122在exosome中具有更高的敏感性。