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目的:通过离体实验,研究血管活性肠肽(VIP)是否通过p38MAPK信号通路调控小鼠肺泡巨噬细胞活化。通过在体实验,探讨肺肠合治法是否通过增加内源性VIP,抑制p38MAPK信号通路,调控小鼠肺泡巨噬细胞活化,治疗小鼠支气管哮喘,为肺肠合治法的临床应用提供实验依据。方法:离体实验,以体外培养的原代小鼠肺泡巨噬细胞为研究对象,将小鼠肺泡巨噬细胞均分为对照组,活化组和VIP处理组。通过LPS+IFN-γ诱导肺泡巨噬细胞活化,VIP处理组另外给予外源性VIP刺激。采用ELISA法检测各组细胞培养液中TNF-α、IL-6的含量。Western Blot法检测各组细胞内TNF-α、IL-6、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的含量。Q-PCR法检测各组细胞TNF-α、IL-6、p38MAPK mRNA的表达水平。在体实验,以昆明小鼠为研究对象,将小鼠随机分为空白组、模型组、西药治疗组、中药治肺组和肺肠合治组。通过卵清蛋白(OVA)致敏复制小鼠支气管哮喘模型,观察各组小鼠状态,制作肺组织病理切片,采用HE染色、AB-PAS染色、MASSON染色观察肺组织炎性浸润、黏液分泌、气道纤维化情况。ELISA法检测小鼠血清VIP含量。Western Blot法检测各组小鼠肺组织中TNF-α、IL-6、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的含量。Q-PCR法检测各组小鼠肺组织中TNF-α、IL-6、p38MAPK mRNA的表达水平。结果:离体实验:1、ELISA结果显示:与对照组比较,活化组细胞培养液中的TNF-α、IL-6的含量显著增高(P<0.01);与活化组比较,VIP处理组细胞培养液中TNF-α、IL-6的含量显著下降(P<0.01)。2、Western Blot结果显示:与对照组比较,活化组细胞内TNF-α、IL-6、p-p38MAPK蛋白含量显著增高(P<0.01);与活化组比较,VIP处理组细胞内TNF-α、IL-6、p-p38MAPK蛋白含量显著下降(P<0.01)。3、Q-PCR结果显示:与对照组比较,活化组细胞TNF-α、IL-6、p38MAPK mRNA的表达水平显著增高(P<0.01);与活化组比较,VIP处理组细胞TNF-α、IL-6、p38MAPK mRNA的表达水平显著下降(P<0.05)。在体实验:1、行为改变:造模期间,正常组小鼠毛色光泽,食欲旺盛,双目有神,行动敏捷;模型组小鼠毛色暗淡,食欲减弱,于雾化激发时出现躁动不安或倦怠少动,呼吸加深、加快,口唇紫绀,频繁抓口鼻及四肢,点头样呼吸,弓背,前肢缩抬,鼻煽,抽搐,腹肌明显收缩等症状。随着激发次数增加,模型组小鼠症状逐渐加重,各干预组较模型组的症状不同程度减轻。2、病理改变:HE染色:空白组气道周围未见明显炎症细胞浸润,管腔内未见脱落细胞,管壁完整,肺泡结构完整;模型组气道、血管周围有大量炎症细胞浸润,管腔内有大量脱落细胞,管壁不完整,肺泡结构破坏;各干预组气道周围炎症细胞浸润有所缓解。AB-PAS染色:空白组气道上皮未见明显杯状细胞化生,管腔内无黏液;模型组气道上皮杯状细胞化生增多,管腔内黏液高分泌;各干预组气道上皮杯状细胞化生及黏液分泌较模型组均见不同程度减轻。MASSON染色:空白组气道上皮下及气道周围未见明显胶原纤维沉积;模型组气道上皮下及气道周围胶原纤维沉积明显,中大气道平滑肌增厚,各干预组也可见不同程度胶原纤维沉积。3、ELISA结果:与空白组比较,模型组小鼠血清VIP含量显著降低(P<0.05);与模型组比较,中药治肺组和肺肠合治组小鼠血清VIP含量均有不同程度增高(P<0.05),西药治疗组未见明显升高(P>0.05)。4、Western Blot结果:与空白组比较,模型组TNF-α、IL-6、p-p38MAPK蛋白含量显著增高(P<0.05);与模型组比较,中药治肺组和肺肠合治组TNF-α、IL-6、p-p38MAPK蛋白含量均有不同程度的降低(P<0.05),其中肺肠合治组TNF-α、IL-6蛋白含量降低较中药治肺组显著(P<0.05);西药治疗组p-p38MAPK蛋白含量降低未见显著性差异(P>0.05)。5、Q-PCR检测结果:与空白组比较,模型组TNF-α、IL-6、p38MAPK mRNA表达水平增高(P<0.05)。与模型组比较,其余三组TNF-α、IL-6、p38MAPK mRNA表达水平均有不同程度的降低(P<0.05),其中肺肠合治组TNF-α、IL-6mRNA表达水平的降低较中药治肺组显著(P<0.05)。结论:1、外源性VIP可以通过P38MAPK信号通路抑制肺泡巨噬细胞的活化,减少炎性因子TNF-α、IL-6的释放;2、肺肠合治法可以通过增加内源性VIP的产生,抑制肺泡巨噬细胞活化,降低肺部炎症,治疗支气管哮喘。