论文部分内容阅读
口腔扁平苔藓（OLP）是一种具有一定自身免疫性疾病特点的T淋巴细胞介导的口腔黏膜慢性炎症性常见疾病，表现为口腔黏膜基底细胞的免疫损伤，损伤过程中Th1细胞来源的致炎细胞因子TNF–α起着重要作用。而IL-10为Th2细胞来源的主要抑炎细胞因子之一。血管活性肠肽(VIP)为一具有免疫活性的小分子神经肽,在生物体内具有多种生物学功能。最近有研究揭示VIP是神经系统和免疫系统之间相互作用的一种信号分子,在机体免疫,尤其是在局部黏膜免疫中起着一定的作用。许多研究表明，VIP抑制脂多糖（LPS）诱导的TNF–α、TGF-β、IL-6、IL-12和NO等促炎性因子的生成而上调抑炎性因子IL-10的表达，以保护细胞，产生强大的抗炎作用。VIP的免疫特性有利于治疗一些Th1细胞为主的自身免疫性疾病。由此推测，VIP可能在OLP发生发展中对黏膜细胞损伤起保护作用，本研究从细胞水平对其免疫神经调节机制进行探讨。目的：观察VIP对人口腔颊黏膜成纤维细胞表达TNF–α和IL–10的影响，初步探讨VIP在OLP发生发展中的作用机制。方法：1.体外组织块法培养正常人口腔颊黏膜成纤维细胞，经传代获得纯化细胞，构建口腔黏膜固有层的细胞模型。2. VIP对人口腔颊黏膜成纤维细胞表达TNF–α和IL–10的影响：以第4～6代纯化的人口腔颊黏膜成纤维细胞为研究对象，将其分为10μg/ml LPS致炎组，10μg/ml LPS+VIP处理组（VIP浓度分别为10-8、10-7、10-6mol/L），空白对照组。采用ELISA法检测细胞上清中TNF–α和IL–10表达量。结果：1.倒置显微镜下观察：正常人口腔颊黏膜成纤维细胞，经传代至第四代可获得纯化细胞。细胞呈长梭形，胞核居中，胞浆丰满，呈束状或呈漩涡状排列。2． ELISA检测结果显示：正常口腔颊黏膜成纤维细胞中仅少量表达TNF–α和IL–10；经LPS诱导后TNF–α表达增加，IL–10表达降低；不同浓度VIP (10-8～10-6mol/L)作用24h后,仅10-8mol/L VIP处理组TNF–α表达量明显低于LPS致炎组（P<0.05）；而各浓度VIP (10-8～10-6mol/L)处理组IL-10表达量均增加，高于LPS致炎组（P<0.05），组间无差别（P>0.05）。结论：1.组织块法确为培养成纤维细胞的经典方法，此方法操作简单，污染率低，成活率高。体外培养细胞与正常人颊粘膜固有层结构相似，可为后续实验做体外模型。2.VIP对LPS诱导的人口腔颊黏膜成纤维细胞TNF–α的表达有明显抑制作用,对IL-10的表达有促进作用。VIP可能在OLP黏膜细胞损伤过程中起保护作用，其保护机制与下调促炎症细胞因子的表达，上调抑炎症细胞因子的表达有关，VIP的保护作用还与其浓度相关联，但具体机制还有待于进一步研究。