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研究背景及目的:支气管哮喘（哮喘）气道重塑涉及免疫、炎症反应及气道结构改变,并最终导致气流受限不可逆,气道阻力增加以及气道高反应性加重,是难治性哮喘的病理基础。近年来,肌成纤维细胞（MF）在哮喘气道重塑中的作用及机制逐渐成为研究热点,成纤维细胞（FB）向MF转化被认作哮喘气道重塑的重要步骤之一。在局部肾素-血管紧张素系统（RAS）中,血管紧张素转化酶（ACE）-血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）-血管紧张素Ⅰ型受体AT1受体轴可促进哮喘胶原蛋白形成。而与该轴相拮抗的RAS新分支——ACE2-Ang-（1-7）-Mas轴是否能够有效抑制FB向MF转化,并下调转化生长因子β1（TGF-β1）,α-平滑肌动蛋白（α-SMA）以及Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）等关键蛋白的水平,进而减轻哮喘气道重塑的发生发展,然而其作用及具体机制尚不明确。因此,本研究拟通过探讨Ang-（1-7）在FB向MF转化过程及其在气道重塑中的作用,寻找相关的作用通路,从分子和细胞水平上揭示ACE2-Ang-（1-7）-Mas轴与MF致气道重塑的关系,为进一步研究哮喘气道重塑的机制,减轻气道重塑的治疗提供新的方向。方法:1.观察AngⅡ在促进人肺成纤维细胞（Human lung fibroblast,HLF）向MF转化过程中刺激局部RAS各组分表达情况,通过Western Blot方法检测不同浓度AngⅡ在不同时间观察点上RAS各组分及气道重塑相关重要蛋白（TGF-β1、α-SMA以及Col-Ⅰ）的表达情况,明确AngⅡ最适宜刺激浓度以及最佳观测时间。2.在AngⅡ诱导的HLF向MF转化细胞模型中,观察Ang-（1-7）对于TGF-β1、α-SMA以及Col-Ⅰ表达的影响。实验设计中将观察组分为四组:（1）空白对照组;（2）单纯AngⅡ刺激组;（3）AngⅡ+Ang-（1-7）联合刺激组;（4）AngⅡ+Ang-（1-7）+A779共培养组,通过Real time-PCR、Western blot方法观察不同组别α-SMA、TGF-β1以及Col-Ⅰ蛋白表达以及mRNA转录的差异,观察Ang-（1-7）特异性Mas受体阻断剂A779对α-SMA、TGF-β1和Col-Ⅰ表达的影响。3.在AngⅡ诱导的HLF向MF转化细胞模型中,观察Ang-（1-7）抑制HLF向MF转化的相关信号通路,设立四个观察比较组,通过Western blot方法观察Ang-（1-7）对于p38MAPK、PⅠ3K、AKT、Smad2/3,JNK及ERK等信号分子磷酸化的影响。给予A779后,观察Ang-（1-7）对上述信号分子的效应是否发生改变。结果:1.明确10-6mmol/l Ang Ⅱ为最佳刺激浓度,而48小时作为最佳观测时间;AngⅡ在促进HLF向MF转化过程中出现局部RAS系统表达失衡,ACE及AT1R表达增高,ACE2表达降低（所有P均<0.05）;AngⅡ可促进α-SMA、TGF-β1、Col-Ⅰ蛋白表达显著增多（所有P均<0.05）。2.在mRNA转录和蛋白表达两个水平上,Ang-（1-7）均能有效降低经Ang Ⅱ刺激后α-SMA、TGF-β1及Col-Ⅰ表达（所有P均<0.05）;给予Mas受体拮抗剂A779干预后,α-SMA、TGF-β1及Col-Ⅰ表达则较AngⅡ+Ang-（1-7）联合刺激组有所增加（所有P均<0.05）。3.经Ang Ⅱ刺激后,TGF-β1/Smad2/3蛋白表达显著增加（P<0.05）,而p38 MAPK、PⅠ3K、AKT、JNK及ERK等磷酸化也显著增加（所有P均<0.05）,但ERK及AKT变化程度显著低于p38、PⅠ3K以及JNK。给予Ang-（1-7）干预后,p38 MAPK、PⅠ3K以及JNK等信号分子的磷酸化显著降低,而这一效应同样可以为A779所拮抗（所有P均<0.05）。结论:1.Ang Ⅱ和Ang-（1-7）均参与HLF-MF转化过程,二者作用相互拮抗;2.Ang-（1-7）可以有效抑制Ang Ⅱ诱导的α-SMA、TGF-β1、Col-Ⅰ表达增多;3.Ang-（1-7）可能通过下调TGF-β1/Smad2/3表达以及降低p38 MAPK、PⅠ3K以及JNK等信号通路相关蛋白的磷酸化发挥拮抗AngⅡ作用,进而抑制HLF-MF转化过程。