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脆性X综合征(FXS)是常见的遗传性智力低下性单基因疾病,呈X连锁不完全显性遗传,发病率仅次于唐氏综合征。FXS的分子遗传学基础主要是脆性X综合征智力低下基因1(FMR1)5非翻译区的三核苷酸(CGG)n重复序列的动态突变引起的。n在5-54之间为正常人；n在55-200之间为前突变患者,一般无异常表现,但在传递过程中会发生(CGG)n重复数的扩增,产生受累的患儿；n>200为全突变患者,男性患者100％表现出典型的FXS症状,主要表现为中度-重度智力低下,发育延迟,行为异常和典型体征如前额突出、颜面狭长、招风耳和大睾丸等,而女性只有约30％-50％表现出不同程度的智力低下,无明显的典型体征。
脆性X综合征单靠临床诊断困难,必须结合实验室方法进行诊断。根据其基因突变的独特性,目前已建立了多种有效的遗传学诊断和产前诊断方法,但各有其局限性,如PCR方法简单、灵敏和快捷,适用于男性群体筛查和前突变的诊断,但不适合于检测女性群体,而经典Southem印迹杂交方法虽然准确性最高,但实验技术难度大、费时和费力,所以建立一种简便、快速、准确和全面的能对脆性X综合征进行筛查和诊断的实验方法是目前的一大研究热点。
研究目的：
建立一种简便、快速、准确和全面的检测FMR1基因突变的方法。
研究对象和方法：
建立检测FMR1突变的甲基化特异性三重PCR(Tms-PCR)方法。并用该方法对99例临床上可疑为脆性X综合征患者(包括不明原因智力低下的患者和家属,以及曾经细胞遗传学诊断为脆性X综合征的患者)的FMR1进行检测和分析,确定其突变类型,并用单管巢式PCR和Southern印迹杂交方法进行验证。
Tms-PCR方法：先用亚硫酸氢钠修饰gDNA模板,设计和合成三对特异性引物,通过非甲基化特异性PCR、甲基化特异性PCR、三条引物甲基化特异性PCR扩增目的基因。结合三个PCR结果综合分析FMR1基因突变类型。
结果：
用Tms-PCR检测的99个样本中发现70例正常男性基因型、27例正常女性基因型,1例男性为全突变基因型,1例女性为前突变基因型。与单管巢式PCR和Southern印迹杂交方法的检测结果相符。
结论：
甲基化特异性三重PCR能同时检测FMR1基因突变的不同类型,且简便、快速、准确和全面,适用于临床对脆性X综合征的筛查和诊断。