论文部分内容阅读
变态反应疾病长期以来一直是医学界的一大难题，世界各国变态反应疾病的总发病率达10％-30％，而且，随着人类生活方式和饮食习惯的变化以及因健康因素水果和蔬菜消费的增加，对植物性食物的过敏反应在过去的十年里迅速增加。
众所周知，芒果是世界范围内广泛栽培的热带水果，由于芒果含有丰富的植物蛋白，因此具有很大的过敏潜能。近年来，市场上有大量由芒果加工而来的食品出售，如饮料、果酱、蜜饯、香料等，因此芒果过敏的情况越来越引起人们的重视。临床研究发现，有超过70％的花粉过敏患者在食用一些水果蔬菜后会出现过敏症状。其中，肌动蛋白抑制蛋白是引起这种现象的原因之一。Henzgen等推测profilin是引起芒果与其它水果和花粉发生交叉反应的原因之一，但是芒果中是否存在交叉反应profilin还未见报道。
本研究提取了芒果果实粗提液，并进行免疫印迹分析。结果发现芒果果实粗提液中有7条阳性条带，并确定了分子量为28kDa、34kDa的两种蛋白为芒果粗提液的主要过敏原。在分子量大约13kDa处有阳性条带出现，推测是profilin与患者血清IgE发生了结合。
于是，本研究利用生物信息学方法对各种水果和蔬菜的泛变应原profilin基因进行核酸序列分析，并根据保守区域设计并合成简并性引物，采用RT-PCR结合RACE技术克隆到2个芒果泛变应原profilin全长基因。序列分析发现，这两个基因编码的氨基酸序列与其它植物花粉、水果及蔬菜profilin具有很高的同源性(>70％)。而且，利用pET28载体在原核表达系统中表达了芒果profilin，并利用Ni<2+>亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，通过免疫印迹实验检测重组芒果profilin的免疫学活性，结果表明，重组芒果profilin具有良好的免疫学活性。
Fall等通过免疫印迹实验发现了一个引起荔枝与桦树花粉及芹菜发生交叉反应的过敏原蛋白，而且还进一步证明了这个过敏原蛋白为profilin。因此本研究也用同样的方法克隆表达了荔枝profilin，免疫印迹实验结果证明纯化后的荔枝profilin也具有良好的免疫学活性。免疫印迹抑制实验和ELISA抑制实验结果证明重组芒果profilin与重组荔枝profilin和桦树花粉profilin(rBet v 2)之间存在较高的交叉反应性。本研究确定了一种理想的芒果果实粗提液提取方法，并且鉴定了芒果果实中存在两个主要过敏原。同时利用原核表达系统高效地表达了重组芒果profilin和荔枝profilin，并证明它们之间存在较高的交叉反应性。这一结果不仅为过敏患者的临床检测提供了资料，同时也对他们的饮食提供一定的指导作用，进一步加强食品安全。