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目的:探索三七总皂苷对前交叉韧带重建术后早期腱骨愈合界面的影响。方法:实验材料及分组成年新西兰大白兔(北京海淀区兴旺实验动养殖场)27只,雄性,取材前实验动物运动良好,可奔跑,未见关节肿胀、跛行等异常。膝关节前抽屉试验均为阴性。27只新西兰大白兔随机分为a)空白对照组;b)阳性对照组;c)实验组。每组9只。造模方法用3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉(1ml/kg)。膝关节屈曲,髌骨内侧入路切开关节囊,暴露关节腔。髌骨向外侧脱位,屈膝切除髌下脂肪垫,暴露趾长伸肌腱及髁间窝交叉韧带。向上牵拉趾长伸肌腱,在其肌肉肌腱结合处切断,保留股骨外髁止点。趾长伸肌腱断端以1/0丝线编织牵引,作为移植物。切断前交叉韧带,制作前交叉韧带损伤模型。胫骨隧道入口在胫骨结节内侧5mm,出点位于前交叉韧带胫骨足印处。经胫骨隧道,从髁间窝股骨外髁内壁钻股骨隧道,入点为前交叉韧带止点,出点在股骨外上髁附近皮质。隧道直径2mm。导针牵引移植物断端,由上向下依次通过股骨隧道、髁间窝、胫骨隧道。拉紧移植物、牵引缝线缝合于胫骨结节皮质固定,完成前交叉韧带重建。腱骨界面干预措施各组实验动物完成模型建立后,分别给予干预措施。药物均采用局部注射的干预方法,于术后一次性注射。a)空白对照组不给予干预措施;b)阳性对照组给予VEGF 1mg干预;c)实验组给予三七总皂苷1mg干预。术后处理膝关节无菌敷料覆盖,绷带包扎。术后的新西兰大白兔均分笼喂养,膝关节不固定,自由活动。观察并记录伤口情况及其步态。术后3天每天肌注青霉素40万单位。饲养温度:22℃-24℃,湿度40%-70%。标本切片及染色3组分别在术后2、4、6周各处死3只大白兔。每组每个时段3只大白兔含6个标本,每个标本为包含股骨段全长隧道的股骨外髁。股骨隧道全长附带股骨外髁标本,10%的福尔马林固定,EDTA脱钙、石蜡包埋,切片机切片(厚度约5um)。所有切片均行常规HE染色,Masson染色,免疫组化Ⅰ型胶原染色,免疫组化CD34染色,免疫组化VEGF染色,免疫组化VEGHR染色。观察指标通过HE染色,CD34染色,VEGF染色,VEGHR染色观察腱骨愈合界面血供的影响。通过HE染色,masson染色,Ⅰ型胶原染色观察腱骨愈合界面胶原纤维的影响。通过HE染色,masson染色观察腱骨愈合界面骨形成的影响。结果:1.三七总皂苷对前交叉韧带重建术后早期血供的影响。HE染色血管计数前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第2周血管计数单因素方差分析,空白组(56.38 ± 36.55),VEGF组(110.47 ± 39.27),三七总皂苷组(79.43 ± 50.49),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(62.58),VEGF组平均秩次(121.72),三七总皂苷组平均秩次(87.21),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中VEGF组在前交叉重建术后腱骨愈合界面2周血管计数最多,其次为三七总皂昔组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第4周血管计数单因素方差分析,空白组(79.25±29.08),VEGF组(82.38±37.73),三七总皂苷组(163.78±71.74),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(68.06),VEGF组平均秩次(71.28),三七总皂昔组平均秩次(132.16),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂昔组在前交叉重建术后4周腱骨愈合界面血管计数最多,其次为VEGF 组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第6周血管计数单因素方差分析,空白组(63.08±43.37),VEGF组(122.20±77.00),三七总皂苷组(133.08±75.00),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(59.76),VEGF组平均秩次(101.4),三七总皂苷组平均秩次(110.34),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后6周腱骨愈合界面血管计数最多,其次为VEGF 组。CD34染色血管计数前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第2周血管计数单因素方差分析,空白组(61.67 ±11.24),VEGF组(127.33 ±24.58),三七总皂苷组(150.33 ± 10.60),三组P(Levene Statistic)>0.05,方差齐、P<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后腱骨愈合界面2周血管计数最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第4周血管计数单因素方差分析,空白组(78.00 ±1.73),VEGF组(220.67 ±22.72),三七总皂苷组(172.67 ±16.92),三组P(Levene Statistic)>0.05,方差齐、P<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中VEGF组在前交叉重建术后4周腱骨愈合界面血管计数最多,其次为三七总皂苷组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第6周血管计数单因素方差分析,空白组(92.00±3.61),VEGF组(157.33±43.66),三七总皂苷组(47.00± 12.12),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(5.00),VEGF组平均秩次(8.00),三七总皂苷组平均秩次(2.00),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中VEGF组在前交叉重建术后6周腱骨愈合界面血管计数最多。VEGF染色评分前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面VEGF染色评分结果。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第2周VEGF染色评分单因素方差分析,空白组(1.67±0.81),VEGF组(4.67 ± 1.51),三七总皂苷组(6.00 ± 0.00),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(3.67),VEGF组平均秩次(10.83),三七总皂苷组平均秩次(14.00),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后腱骨愈合界面2周染色评分最高,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第4周VEGF染色评分单因素方差分析,空白组(2.33±1.97),VEGF组(5.50±1.23),三七总皂苷组(6.17±1.60),三组P(Levene Statistic)>0.05,方差齐、P<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后4周腱骨愈合界面染色评分最高,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第6周血管计数单因素方差分析,空白组(2.83±1.60),VEGF组(5.33±1.03),三七总皂苷组(7.50±1.64),三组P(Levene Statistic)>0.05,方差齐,P<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后6周腱骨愈合界面血管染色评分最高,其次为VEGF组。VEGHR染色评分前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面VEGHR染色血管计数结果。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第2周染色评分单因素方差分析,空白组(4.50±1.23),VEGF组(6.50±1.23),三七总皂苷组(5.67±0.82),三组P(Levene Statistic)>0.05,方差齐、P<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中VEGF组在前交叉重建术后腱骨愈合界面2周染色评分最多,其次为三七总皂苷组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第4周染色评分单因素方差分析,空白组(3.67±1.51),VEGF组(5.33±1.03),三七总皂苷组(6.00±0.00),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(5.17),VEGF组平均秩次(10.33),三七总皂苷组平均秩次(13.00),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后4周腱骨愈合界面染色评分最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第6周染色评分单因素方差分析,空白组(5.33±1.03),VEGF组(7.00±1.55),三七总皂苷组(8.00± 1.64),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(5.83),VEGF组平均秩次(10.67),三七总皂苷组平均秩次(12.00),P(Kruskal-Wallis Test)>0.05,说明三组之间无统计学意义。说明前交叉重建术后腱骨愈合界面6周腱骨愈合界面染色评分三组无明显差异。2.三七总皂苷对前交叉韧带重建术后早期胶原纤维的影响。HE染色胶原纤维前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面HE染色胶原纤维结果。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第2周胶原纤维单因素方差分析,空白组(24.98±13.70),VEGF组(28.70± 13.96),三七总皂苷组(24.10±8.98),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(85.08),VEGF组平均秩次(99.61),三七总皂苷组平均秩次(86.82),P(Kruskal-Wallis Test)>0.05,说明三组之间无统计学意义,说明前交叉重建术后腱骨愈合界面2周胶原纤维三组无明显差异。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第4周胶原纤维单因素方差分析,空白组(22.62±9.79),VEGF组(25.23±10.04),三七总皂苷组(29.00±11.41),三组P(Levene Statistic)>0.05,方差齐、P<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后4周腱骨愈合界面胶原纤维最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第6周胶原纤维单因素方差分析,空白组(14.70±4.97),VEGF组(27.10±11.56),三七总皂苷组(27.30±6.22),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(43.53),VEGF组平均秩次(108.68),三七总皂苷组平均秩次(119.29),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后6周腱骨愈合界面胶原纤维最多,其次为VEGF 组。Ⅰ型胶原纤维前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第2周Ⅰ型胶原染色单因素方差分析,空白组(29.03±5.59),VEGF组(37.53±5.14),三七总皂苷组(49.43±9.72),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(20.37),VEGF组平均秩次(45.55),三七总皂苷组平均秩次(70.58),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后腱骨愈合界面2周胶原纤维最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第4周胶原纤维单因素方差分析,空白组(36.67±6.35),VEGF组(43.70±9.46),三七总皂苷组(51.07±12.90),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(27.80),VEGF组平均秩次(48.63),三七总皂苷组平均秩次(60.07),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂昔组在前交叉重建术后4周腱骨愈合界面胶原纤维最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第6周胶原纤维单因素方差分析,空白组(48.63±7.43),VEGF组(72.87±12.41),三七总皂苷组(79.37±12.96),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(18.22),VEGF组平均秩次(53.32),三七总皂苷组平均秩次(64.97),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后6周腱骨愈合界面胶原纤维最多,其次为VEGF组。masson染色胶原纤维前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第2周胶原纤维单因素方差分析,空白组(26.60±5.00),VEGF组(44.43±7.33),三七总皂苷组(51.07±8.95),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(16.28),VEGF组平均秩次(53.55),三七总皂苷组平均秩次(66.67),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后腱骨愈合界面2周胶原纤维最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第4周胶原纤维单因素方差分析,空白组(32.23±4.70),VEGF组(46.23±9.52),三七总皂苷组(56.43±11.99),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(18.90),VEGF组平均秩次(50.65),三七总皂苷组平均秩次(66.95),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后4周腱骨愈合界面胶原纤维最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第6周胶原纤维单因素方差分析,空白组(42.90±6.78),VEGF组(58.43±10.79),三七总皂苷组(63.83±9.80),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(20.40),VEGF组平均秩次(53.08),三七总皂昔组平均秩次(63.02),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后6周腱骨愈合界面胶原纤维最多,其次为VEGF组。3.三七总皂苷对前交叉韧带重建术后早期骨形成的影响。HE染色骨形成前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第2周骨形成单因素方差分析,空白组(21.12±8.16),VEGF组(28.48±16.44),三七总皂苷组(44.50±17.90),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(57.99),VEGF组平均秩次(82.3),三七总皂苷组平均秩次(131.21),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后腱骨愈合界面2周骨形成最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第4周骨形成单因素方差分析,空白组(36.68±9.40),VEGF组(43.10±10.35),三七总皂苷组(59.67±15.09),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(56.93),VEGF组平均秩次(81.58),三七总皂苷组平均秩次(132.99),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后4周腱骨愈合界面骨形成最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第6周骨形成单因素方差分析,空白组(50.25±8.87),VEGF组(67.68±15.07),三七总皂苷组(76.02±18.67),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(48.68),VEGF组平均秩次(101.05),三七总皂苷组平均秩次(121.77),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后6周腱骨愈合界面骨形成最多,其次为VEGF组。masson染色骨形成前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第2周骨形成单因素方差分析,空白组(35.40±4.77),VEGF组(52.67±21.17),三七总皂苷组(73.97±14.73),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(24.93),VEGF组平均秩次(42.88),三七总皂苷组平均秩次(68.68),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后腱骨愈合界面2周骨形成最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第4周骨形成单因素方差分析,空白组(45.83±9.12),VEGF组(66.73±12.9),三七总皂苷组(74.93±14.43),三组P(Levene Statistic)>0.05,方差齐、P<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后4周腱骨愈合界面骨形成最多,其次为VEGF组。前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面第6周骨形成单因素方差分析,空白组(54.03± 11.00),VEGF组(67.03±25.04),三七总皂苷组(100.83±21.90),三组P(Levene Statistic)<0.05,方差不齐、Kruskal-Wallis Test示,空白组平均秩次(25.67),VEGF组平均秩次(40.17),三七总皂苷组平均秩次(70.67),P(Kruskal-Wallis Test)<0.05,说明三组之间有统计学意义,其中三七总皂苷组在前交叉重建术后6周腱骨愈合界面骨形成最多,其次为VEGF组。结论:1.三七总皂苷对前交叉韧带重建术后早期腱骨愈合界面的血供有促进作用。三七总皂苷组对前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面术后第4周,第6周新生血管生成较空白组和VEGF组有明显的促进作用,其作用机制可能主要与促进多种细胞因子分泌,促进新生血管形成有关。2.三七总皂苷能促进前交叉重建术后早期腱骨愈合界面胶原纤维的形成。三七总皂苷对前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面术后第2周,第4周,第6周胶原纤维的形成较空白组和VEGF组有明显的促进作用,其作用机制可能主要与促进Ⅰ型胶原大量合成,最终促进胶原纤维形成有关。3.三七总皂苷能促进前交叉韧带重建术后早期腱骨愈合界面骨形成。三七总皂苷对前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面术后第2周,第4周,第6周骨形成的较空白组和VEGF组有明显的促进作用,其作用机制可能主要与促进成骨细胞增长,抑制破骨细胞增长有关。