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禽白血病(Avian leucosis,AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的以造血细胞恶性增生为主的多种肿瘤性疾病,是严重危害我国养禽业的主要疾病之一。到目前为止仍无有效防治的药物和疫苗,仅通过淘汰阳性鸡来控制该病。因此,全面了解禽白血病的流行情况,并从宿主遗传抗性角度进行研究对有效防控该病具有重要的意义。1、本研究应用病毒分离、ELISA和RT-PCR等方法对广东省5个不同大型种鸡场共29948份样品进行禽白血病流行病学调查,共检测到171份阳性样品,总体阳性率为0.58%;其中J亚群阳性率占92.98%,A/B/J亚群混合感染阳性率仅占7.02%。2、本研究对分离的10株ALV-J毒株的gp85和U3进行序列分析,结果表明,ALV-J在不断的发生变异,gp85与HPRS103毒株同源性为93.6~96%,U3区与HPRS103同源性为90.6%~96.9%;基因变异十分迅速,某些碱基的改变或缺失对病毒致病力和传播力等的影响有待进一步研究。3、本研究对42个不同品系鸡ALV-B/D/E受体基因tvb进行测序和遗传多样性分析,结果发现:在白来航鸡中已报道的突变位点tvbr1(m RNA172C>T)、tvbs3(m RNA184 T>A)和tvbr2(m RNA374G>C)存在于少数鸡种中;商品优质鸡中普遍存在tvbr3(m RNA298C>T)突变位点。各品种间tvb基因突变位点的基因型频率差异较大。4、本研究对变异位点tvbr3(m RNA 298C>T)进行功能验证。(1)细胞感染性试验:通过引入EGFP荧光基团构建ALV-B/D/E报告病毒表达载体,并拯救出RCASBP(B/D/E)-EGFP病毒。用该病毒分别感染野生型CEF(tvbs1s1),杂合突变型CEF(tvbs1r3)和纯合突变型CEF(tvbr3r3),用流式细胞仪检测不同基因型CEF的EGFP阳性率。结果表明:tvbs1s1基因型细胞对RCASBP(B/D/E)-EGFP病毒易感,而tvbr3r3纯合突变型CEF对RCASBP(B/D/E)-EGFP病毒的易感性降低,表明tvbr3突变使宿主对RCASBP(B/D/E)-EGFP病毒的感染产生遗传抗性。(2)体内动物试验:将tvbr3突变野生型、杂合突变型和纯合突变型的1日龄小鸡随机分组,饲养于隔离器,1日龄和5日龄分别腹腔注射ALV-B,攻毒1个月后,采集各组小鸡的血样,利用细胞病毒分离和RT-PCR等方法检测病毒血症,结果表明:tvbr3突变降低宿主对ALV-B野毒的易感性,从而产生遗传抗性。5、本研究对流行病学调查中5个种鸡场的23个品系鸡进行ALV-B/D/E受体基因tvb的遗传多样性分析,结果显示:这23个品系鸡ALV-B/D/E受体基因tvb普遍存在tvbr3(m RNA298C>T)突变位点,且该突变基因型频率高达34~100%。与流行病学调查中AB亚群ALV阳性率仅仅占7.02%的结果相对应。进一步证明tvbr3(m RNA298C>T)突变位点具有遗传抗性。本研究在禽白血病的流行病学调查的基础上,对ALV-B/D/E受体基因tvb遗传多样性进行分析,对建立我国特有的优质鸡抗ALV的核心育种体系并从源头上控制住ALV、推进优质鸡事业的不断发展具有重要意义。