论文部分内容阅读
目的:检测芦荟大黄素(aloe emodin,AE)单用及联用顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum,CDDP)对人高转移三阴性乳腺癌MDA-MB231细胞增殖的影响及端粒酶催化亚基hTERT(human telomerase reverse transcriptase)的作用,测定两药是否具有协同效应。检测AE对乳腺癌MDA-MB231细胞端粒酶催化亚基hTERT及端粒酶调控因子c-Myc、WT1和E2F1的作用,探讨其可能的作用机制。方法:1、取对数期生长的乳腺癌MDA-MB231细胞,培养24 h后,设立芦荟大黄素组(终浓度分别为5μmol·L-1,10μmol·L-1,20μmol·L-1,30μmol·L-1,40μmol·L-1,50μmol·L-1)、阴性对照组(只含培养液和细胞)、溶剂组(含0.1%DMSO的培养液和细胞)和空白对照组(不加细胞)。MTT法检测AE作用48 h后,各浓度处理对癌细胞增殖的影响。30μmol·L-1AE分别处理细胞24 h,48 h,60 h,72 h,MTT法检测不同时间处理对细胞增殖的影响。2、使用终浓度分别为2μmol·L-1,4μmol·L-1,6μmol·L-1,8μmol·L-1,12μmol·L-1,24μmol·L-1 CDDP单用或与5μmol·L-1,10μmol·L-1,20μmol·L-1,30μmol·L-1,40μmol·L-1,50μmol·L-1AE联用处理细胞48 h后,MTT法分别检测CDDP单用或联用AE对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖的影响。3、Western blot检测0μmol·L-1(对照组),10μmol·L-1,30μmol·L-1,50μmol·L-1AE分别处理MDA-MB231细胞48 h后,h TERT、c-Myc、WT1和E2F1蛋白的表达水平。4、Western blot检测30μmol·L-1AE分别处理MDA-MB231细胞0 h(对照组),24 h,48 h,60 h,72 h后,hTERT、c-Myc、WT1和E2F1蛋白的表达水平。5、Western blot检测10μmol·L-1AE单用或联用12μmol·L-1CDDP对hTERT蛋白的表达水平。结果:1、MTT检测显示,与对照相比,AE显著抑制体外培养的MDA-MB231细胞的增殖,且抑制程度随着AE浓度的增加而增强,IC50为22.21μmol·L-1;在同一浓度AE作用下,细胞抑制程度随着药物作用时间的延长显著增大。2、MTT检测显示,CDDP单用时细胞的IC50值是11.05μmol·L-1,联用AE后的IC50为9.51μmol·L-1;它们的联用指数CI50<1,结果表明联用后,AE可显著提升MDA-MB231细胞对CDDP的敏感性,提示AE可能具有化疗增敏作用,它们之间存在协同效应。3、Western blot结果表明,芦荟大黄素增强调控因子WT1蛋白的表达,抑制h-TERT和端粒酶调控因子c-Myc的表达,抑制效果与药物浓度呈正相关;低浓度AE促进调控因子E2F1的表达,但高浓度AE抑制其表达。4、Western blot结果表明,随着芦荟大黄素处理时间的延长,hTERT、c-Myc表达量下降,抑制效果与药物作用时间呈正相关;而WT1、E2F1表达量则增强。5、Western blot表明,芦荟大黄素能加强顺铂对端粒酶催化亚基hTERT表达水平的抑制作用。结论:1、芦荟大黄素具有抑制乳腺癌MDA-MB231细胞增殖的作用,效应随着AE浓度和作用时间的增大而增加,呈浓度-时间依赖性。AE能增强CDDP对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖的抑制作用及对hTERT蛋白表达的抑制作用,两药具有协同效应。2、AE抑制乳腺癌MDA-MB231细胞端粒酶催化亚基hTERT表达,与端粒酶正向调控因子c-Myc下调和负向调控因子WT1、E2F1上调有关。