苦瓜不同类型胚的植株再生及遗传多样性分析

• 作 者: 鄢郁霖
• 机 构: 四川农业大学
• 出 处: 四川农业大学
• 发表日期: 2009年期
• 关键词: 苦瓜 胚培养 遗传多样性 RAPD

本研究以‘碧秀’苦瓜的正常种子和畸形种子为材料,通过离体培养获得植株,采用RAPD技术、形态观察等手段,对植株的遗传多样性进行研究,结果表明:1.畸形种子的界定及其出现频率本实验对142个成熟碧秀苦瓜中的种子出现情况做了统计,并将苦瓜的种子分为正常种子和畸形种子两类,畸形种子均为发育不良的瘪粒种子。正常的苦瓜成熟种子为棕褐色,平均粒重为0.178g;而瘪粒种子为白色,平均粒重为0.046g,不及正常种子粒重的1/3。在142个碧秀苦瓜中,收集到3071颗正常种子,333颗畸形瘪粒种子,平均每个果实中有21.627颗正常种子和2.345颗瘪粒种子,瘪粒种子出现频率为10.84%。2.离体培养（1）正常种子最佳接种培养基为不附加任何其它物质的MS基本培养基,萌发率可达88.9%,成苗率可达83.3%;而瘪粒种子最佳接种培养基为MS+0.5mg/L 6-BA,萌发率可达66.7%,成苗率可达41.7%。（2）正常种子最佳增殖培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L IBA;而瘪粒种子最佳增殖培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L IBA。（3）正常种子最佳生根培养基为1/2MS+0.2mg/L IBA+20g/L蔗糖;而瘪粒种子最佳生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA+30g/L蔗糖。3.形态鉴定形态鉴定的结果表明,与正常种子苗相比,瘪粒种子苗在形态上表现出差异,种子不易萌发,子叶比正常种子小,茎段细小,真叶小且畸形,有的真叶不能萌发,正常种子根系发达,主根须根都很多,但是瘪粒种子根系不发达,很多都只有一条或几条细小的主根,基本没有须根。4.RAPD鉴定（1）采用改良CTAB法提取DNA,结果表明:幼嫩的组培苗叶片提取效果相当好,不易褐化,质量好,A₂₆₀/A₂₈₀的比值为1.8-2.0,无需去除RNA就能用于RAPD分析,符合RAPD反应的要求。（2）采用的反应体系为:反应总体积25μl,其中引物浓度0.2μmol/L,Mg²⁺的浓度为1.5mmol/L;dNTPs的浓度为0.2mmol/L;Taq酶的浓度为1U;Buffer 25mmol/L;DNA模板浓度为20 ng。（3）反应程序:94℃预变性2 min后进行45个循环,每个循环包括94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸2 min,完成最后一个循环后在72℃保温10 min,然后置于4℃待电泳检测。（4）从64个随机引物中筛选出14个条带数量多且清晰、多态性好的随机引物用于扩增。总共得到1420条清晰谱带,其中特异性谱带146条,占总条带数的10.3%。